维药榅桲提取物对改善胰岛素抵抗作用和机理的研究

摘要

目的：应用榅桲提取物和3T3-L1前脂肪细胞株，探讨3T3-L1脂肪细胞的增殖以及榅桲提取物对改善胰岛素抵抗药理作用和机制。
　　方法：将3T3-L1细胞分组后，对照组加正常培养液，模型组中加入不同浓度的榅桲提取物，分别在24,42,72h,96h时，使用MTT检测细胞增殖情况；诱导分化后进行葡萄糖消耗量测定且用油红O染色和TG含量测定来鉴别诱导是否成功；对分化好的细胞进行分组处理，加地塞米松诱导胰岛素抵抗，取上清液，以培养基中的葡萄糖消耗量反映胰岛素抵抗程度，葡萄糖含量用葡萄糖检测试剂盒测定；比较正常对照，模型组，阳性药物组，及榅桲提取物（低，中，高）组，使用葡萄糖测定试剂盒检测培养基中葡萄糖的消耗量和FFA含量；使用PCR法检测GLUT4和IRS的表达。
　　结果：与对照组比较，50μg/ml，200μg/ml，400μg/ml的生物碱和多糖能明显抑制细胞增殖，浓度越高，抑制作用越明显。榅桲总黄酮的抑制率与对照组相比较，作用并不明显；经过TG含量测定发现，与对照组相比，成熟的3T3-L1细胞中脂质含量增多，差异具有统计学意义（P<0.01）。结合油红O染色可以判定前脂肪细胞成功的诱导成成熟的脂肪细胞。通过葡萄糖试剂盒检测发现模型组中的葡萄糖的利用率减少，尤其在48h中，可以鉴定胰岛素抵抗模型成立。3T3-L1细胞中加入榅桲生物碱和榅桲多糖后，可以明显改善3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖利用率，与对照相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比，模型组细胞内的游离脂肪酸明显高于正常对照组，表明形成胰岛素抵抗模型的同时FFA水平也上升。罗格列酮组与模型组相比，其细胞内的FFA水平明显下降。同时，榅桲有效提取物生物碱和多糖均能够有效抑制细胞内游离脂肪酸的合成。诱导分化之后的3T3-L1细胞中的脂肪含量明显提高，差异具有统计学意义（P<0.01）罗格列酮和榅桲提取物生物碱和多糖能够改善胰岛素抵抗细胞内Glut4和IRS-1基因表达。
　　结论：确定了最佳的细胞铺板密度和榅桲3个提取物对3T3-L1脂肪细胞的最大给药浓度；用油红O染色和TG含量检测方法将3T3-L1前脂肪细胞成功诱导分化成成熟的脂肪细胞;在3T3-L1细胞培养基中加入地塞米松刺激后,可以成功建立3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型,榅桲提取物多糖和生物碱可以明显改善3T3-L1细胞胰岛素抵抗，增强脂肪细胞对葡萄糖摄取和利用的能力;榅桲提取物能改善GLUT4基因的表达

目录

声明

中英文缩略词对照表

前言

研究内容与方法

1 研究对象

2 实验方法

3 统计学方法

实验技术路线图

结果

1.1 3T3-L1前脂肪细胞10天的基本生长规律

1.2不同时间榅桲提取物对3T3-L1前脂肪细胞的影响

1.3 榅桲提取物对细胞增殖的抑制作用

1.4 3T3-L1脂肪细胞的分化规律

1.5 分化细胞后3T3-L1细胞内甘油三酯含量

1.6 构建胰岛素抵抗3T3-L1细胞模型

1.7 罗格列酮和榅桲有效提取物对3T3-L1细胞胰岛素抵抗的作用

1.8 罗格列酮和榅桲有效提取物生物碱和多糖引起胰岛素抵抗细胞内Glut4和IRS-1基因表达的改变

1.8 榅桲有效提取物生物碱和多糖均能够有效抑制细胞内游离脂肪酸的合成

讨论

1 细胞及药物的选择

2 榅桲提取物改善胰岛素抵抗作用

3 榅桲提取物对FFA的影响

4 GLUT4，IRS-1的表达水平

5 补充说明

小结

致谢

参考文献

综述：胰岛素抵抗的机制以及模型建立的研究进展

攻读硕士学位期间发表的学位论文

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