黄诺马苷人工抗原的合成及其单克隆抗体的制备

摘要

目的：合成并鉴定两色金鸡菊中活性成分黄诺马苷（Flavanomarein，FM）的人工抗原，免疫动物产生抗黄诺马苷的单克隆抗体，为两色金鸡菊及FM的免疫学应用奠定基础。方法：1. 运用高碘酸氧化法将黄诺马苷与牛血清白蛋白（BSA）及人血清白蛋白（HSA）偶联，形成FM-BSA和FM-HSA人工抗原；运用曼尼希法（M annich）将黄诺马苷与阳离子化的牛血清白蛋白（cBSA）以及多聚赖氨酸（PLL）偶联，形成FM-cBSA和FM-PLL人工抗原；2. 采用薄层色谱法对人工抗原进行鉴定，基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）测定FM-BSA和FM-HSA人工抗原的偶联比。3. 采用BCA蛋白浓度测定试剂盒检测FM-cBSA和FM-PLL的蛋白浓度。4. 采用合成的人工抗原FM-BSA、FM-cBSA和FM-PLL免疫BALB/c小鼠，FM-HSA免疫新西兰白兔。5. 间接酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清抗体的效价，间接竞争ELISA法检测抗血清中抗体的特异性。6. 硫酸铵沉淀法粗提兔血清中的单克隆抗体。聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定单克隆抗体。7. 采用间接竞争ELISA法检测抗黄诺马苷的单克隆抗体与其他化合物的交叉反应率。结果：1. 薄层色谱结果显示人工抗原均偶联成功。2. MALDI-TOF-MS结果显示FM-BSA和FM-HSA的偶联比分别为4.77∶l和5.52∶l。3. 蛋白浓度测定结果显示FM-cBSA和FM-PLL的蛋白浓度分别为1.44和0.61 mg·mL?1。4. 间接竞争ELISA结果显示，由FM-BSA、FM-cBSA和FM-PLL免疫的小鼠未产生稳定的抗黄诺马苷抗体，由FM-HSA免疫的新西兰白兔均产生了稳定的抗黄诺马苷单克隆抗体，检测范围10-160 ng·mL?1。结论：成功合成黄诺马苷人工抗原，得到黄诺马苷单克隆抗体及黄诺马苷的ELISA检测方法，为两色金鸡菊及FM的免疫分析方法奠定了基础。

目录

声明

中英文缩略词对照表

前言

研究内容

1 实验材料

2 方法

结果

1 人工抗原的鉴定结果

2 蛋白浓度的测定

3 间接ELISA法条件优化结果

4 间接ELISA法测定血清中抗体的效价结果

讨论

1 载体蛋白的选择

2 人工抗原合成方法的选择

3 人工抗原的鉴定

4 人工抗原偶联比的测定

5 动物免疫

6 抗体效价的测定方法

7 兔血清中单克隆抗体的粗提

8 交叉反应率

小结

参考文献

综述：人工抗原的合成及鉴定研究现状

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