TNF-α对牙周膜干细胞骨向分化及Notch信号通路影响的实验研究

摘要

目的：研究肿瘤坏死因子-α对牙周膜干细胞骨向分化及Notch信号通路的影响，初步探讨在肿瘤坏死因子-α影响下Notch信号通路对牙周膜干细胞成骨分化的调控作用。方法：采用酶消化联合组织块法获取牙周膜干细胞，通过流式细胞仪检测间充质干细胞表面标记物CD105、CD90、CD146、CD45、CD31 的表达，将牙周膜干细胞分为实验组（肿瘤坏死因子-α浓度为10ng/ml）和对照组（肿瘤坏死因子-α浓度为0ng/ml），使用CCK-8法检测牙周膜干细胞增殖能力；通过碱性磷酸酶活性实验、茜素红染色实验、实时定量PCR实验，检测肿瘤坏死因子-α对牙周膜干细胞成骨能力的影响；实时定量PCR检测Notch信号通路受体Notch1、Notch2、Notch3；配体JAG1、JGA2、DLL1；细胞内效应分子Hes-1的表达。结果：流式细胞仪检测结果显示CD105、CD90 及CD146 表达阳性，CD45、CD31 表达阴性；CCK-8 法结果显示肿瘤坏死因子-α能够促进牙周膜干细胞增殖能力（P＜0.05）；碱性磷酸酶活性结果显示，实验组与对照组相比，碱性磷酸酶活性降低（P＜0.05）；茜素红染色结果发现，与对照组相比，实验组矿化结节变小，结节数量减少；实时定量PCR结果显示，与对照组相比，成骨标志基因牙骨质附着蛋白、骨桥蛋白、Runt相关转录因子2表达量明显下降（P＜0.05）；Notch信号通路相关分子中Notch1、Notch2、JAG1、JGA2、Hes-1 的表达水平显著降低（P＜0.05），而Notch3、DLL1的水平反而升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：肿瘤坏死因子-α能够促进牙周膜干细胞增殖而抑制其骨向分化，同时抑制Notch信号通路的表达，说明Notch信号通路对牙周膜干细胞矿化诱导过程具有一定的调控作用。

目录

声明

中英文缩略词对照表

前言

研究内容与方法

1 研究对象

2 实验内容与方法

3 质量控制

4 统计学分析

5 技术路线图

结果

1 牙周膜干细胞原代分离培养

2 PDLSCs流式分子鉴定

3 PDLSCs实验组与对照组细胞增殖能力比较

4 PDLSCs实验组与对照组骨向分化能力比较

讨论

小结

致谢

参考文献

附录

综述:干细胞参与骨再生过程Notch信号通路的调控作用

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