红花种质资源的SRAP分子鉴定及其与品质相关的分子标记研究

摘要

红花(CarthamustinctoriusL.)是菊科(Compositae)红花属中唯一的栽培种。在我国，红花的干燥管状花，是传统的活血化瘀中药，具有活血通经，去瘀止痛之功效。 由于长期的自然选择和人工选择的结果，红花种内产生了明显的分化，形成了丰富的种质资源。不同红花品种从外部的形态特征到内部的化学成分组成及含量上均呈现出很大的差异，这为红花的品种选育提供了丰富的遗传基础，也为进一步开发红花的利用价值提供了更多的选择。单凭表型性状的差异进行选择已不能满足红花育种工作的需要。本研究运用SRAP(sequence-relatedamplifiedpolymorphism，SRAP)标记对包括野生种在内的25个红花品种的遗传多样性进行了分析，从分子水平对红花种质资源进行了鉴定；同时筛选与红花中药用有效成分(羟基黄色素A)含量高低相关的分子标记，其主要结果如下： 一、利用优化后的SRAP体系用30对引物对25个红花品种的基因组DNA进行PCR扩增，多态性好的9对引物共扩增出483条带，其中多态性带274条，平均每对引物可扩增出53条DNA片断，30条多态性带，占总位点的57％。聚类分析结果表明，在GS为0.29时，25个红花品种被分成两类，除13号野生种和4号栽培品种聚在一起外，野生种和其他栽培种完全分开。二者不仅在生物学性状上相似，而且不同引物的扩增条带中几乎都出现相同的带型，因此，我们推测4号品种可能来源于野生种绵毛红花。GS值为0.43时，25个红花品种被聚为六类，4号栽培品种和13号野生种绵毛红花聚在一起外，其它栽培种则分成五类。在栽培品种间整体遗传相似系数较低，利用引物的不同组合，可明显区分不同品种。 二、在此基础上，对区别于栽培种和野生种的特异性条带进行回收测序，四对引物共扩增出5条特异性条带，即SPW237，SPW219，SPW371，SPW292，SPW206。其精确长度分别为：237bp、219bp、371bp和292bp、206bp。这些特异性条带序列的获得，为栽培种红花(CarthamustinctoriusL.)与野生种绵毛红花(CarthamuslanatusL.)的分子鉴别提供了有效途径。 三、采用HPLC法，对红花亲本及杂交F2代植株的羟基黄色素A含量进行综合分析，结果表明，F2代各植株含量呈连续性变异，红花羟基黄色素A含量为主-多效基因控制的数量性状。在此基础上，采用BSA法建立了羟基黄色素A品质性状的极端基因池，利用优化后的红花SRAP反应体系对基因池用182对引物反复筛选，得到与红花品质相关的3条差异条带。经测序3条特异性片段的精确长度分别为397bp、186bp、221bp,分别命名为：SYAM397，SYAM186，SYAM221，初步认为这些片段可能与控制羟基黄色素A含量高低的基因相关，但这些标记与基因座位的紧密程度需要进一步加以验证。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略语

独创性声明及关于学位论文使用授权的说明

引言

第一章文献综述

第二章红花SRAP扩增体系的建立和优化

第三章红花种质资源的分子鉴定

第四章与红花药用品质相关基因的SRAP分子标记筛选

第五章结论

参考文献

附录

致谢

作者简历