猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因的克隆、表达与免疫原性分析

摘要

从猪带绦虫六钩蚴中提取总RNA，用Oligo软件设计TSOL16基因特异性引物，通过RT-PCR扩增出559bp的片段，扩增产物连接到pMD18-T载体中，经酶切鉴定、PCR分析和测序后证明，所克隆的559bp片段含TSOL16蛋白基因完整的开放阅读框(ORF)，其核苷酸序列及其编码的氨基酸序列与Genebank登录的TFSOL16基因相应序列的同源性分别是99﹪和97﹪。 参照已测序的TSOL16基因的核酸序列，用Oligo软件设计一对去信号肽且带EcoR I和Xho I酶切位点的原核表达引物，PCR扩增及电泳回收，将PCR产物和原核表达载体pGEX-4T-1分别用EcoR I和Xho I双酶切，克隆TSOL16基因至原核表达载体pGEX-4T-1中，转化到大肠杆菌BL21，经酶切、PCR和测序鉴定证明，TSOL16基因正确插入到pGEX-4T-1载体。用ITPG诱导表达，表达产物通过SDS-PAGE和Western-blotting分析证实TSOL16基因在BL21中成功表达，目的基因与GST以融合形式表达，分子量大小为40ku左右，能被猪带绦虫六钩蚴阳性血清所识别；将表达产物免疫小鼠，进行间接ELISA检测，其抗血清能与猪囊虫粗抗原及纯化的TSOL16重组融合蛋白产物发生免疫学反应。 本研究克隆了猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因，在原核表达系统中进行了表达，证实其表达产物具有免疫原性，从而为猪囊虫基因工程疫苗研制、基因结构与功能研究提供了理论依据和实验材料。

目录

文摘

英文文摘

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第一章引言

第二章文献综述 猪带绦虫功能抗原基因研究进展

第三章猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因的克隆、表达及免疫原性分析

3.1材料方法

3.2结 果

3.3讨 论

3.4结 论

参考文献(References)

附录:

致谢

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