应用单克隆抗体-ELISA法检测啤酒中泡沫活性Z4蛋白质的研究

摘要

本论文研究了啤酒泡沫活性蛋白质(Foam-positive protein)的一种关键组分Z4蛋白质的最佳提取条件，及通过免疫印迹(Western Blot)和质谱分析(Mass spectrum)对Z4蛋白质进行鉴定。并利用Z4蛋白免疫BALB/C小鼠，成功研制出2株Z4蛋白单克隆抗体，及建立了间接EIJSA筛选方法，并在检测抗原方面得到初步应用。具体内容如下： 本实验首先通过40﹪饱和(NH<,4>)<,2>SO<,4>沉淀杂蛋白，再利用70﹪饱和(NH<,4>)<,2>SO<,4>沉淀Z4蛋白；透析过夜，用50mmol.L<'-1>pH8.0 Pbs缓冲液预平衡后的阴离子层析柱(DEAESephadex A-50)进行分离，最后用50mmol.L<'-1>pH7.5的Tris缓冲液预平衡后的凝胶层析柱(Sephadex G.75)进行分离的方法，提取出高纯度泡沫活性Z4蛋白。 利用Z4蛋白质与等量的佐剂(第一次完全佐剂，第二次不完全佐剂)充分乳化后采用腹腔和皮下免疫BALB/C小鼠(200μg/只)，采用间接ELISA法进行筛选克隆，通过反复克隆筛选，最终成功地筛选出2株分泌特异性抗体的单克隆细胞株，分别命名为A4D2、A6H8。对2株单抗的特性鉴定结果为，腹水效价为10<'6>(A4D2)、10<'5>(A6H8)，纯化后浓度为1.5mg.mL<'-1>。A4D2和A6H8具有不同的抗原识别表位。免疫印记结果显示2单抗均具有较好的反应特异性，与浑浊蛋白、LTPl和．Z7无交叉反应。 最后利用ELISA方法的检测啤酒中的泡沫活性蛋白质，确定抗体包被的最佳工作浓度为1.17μg.mL<'-1>(1：1280)，孵抗原的最佳工作浓度为0.5μg．mL<'-1>(1：400)。多抗IgG按1：1000稀释时效果最好。通过双抗体加心法(DS-ELISA)检测结果表明，Z4蛋白的抗体A4D2能检测出啤酒泡沫活性蛋白质Z4的最低浓度为1.875μg.mL<'-1>。所建立的方法用于检测啤酒中泡沫Z4蛋白具有较高的特异性，重复性和稳定性。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于学位论文使用授权的说明

第一章绪论

1.1我国啤酒工业发展概况

1.2啤酒泡沫的概述

1.3单克隆抗体研究

1.4酶联免疫吸附检测技术(ELISA)

1.5对未来的展望

1.6立题背景

1.7本课题的创新之处

1.8课题研究的目标

1.9课题研究的内容

第二章啤酒中泡沫活性蛋白质的提取纯化及其鉴定

2.1啤酒中泡沫活性蛋白质的提取纯化及其性质的研究

2.2啤酒中泡沫活性蛋白质的鉴定

第三章啤酒中泡沫活性Z4蛋白单克隆抗体的制备及其鉴定

3.1前言

3.2材料、试剂、仪器及试剂的配制

3.3方法

3.4结果与分析

3.5讨论

3.6本章小节

本章节照片

第四章利用酶联免疫法测定啤酒中泡沫活性蛋白质的探讨

4.1前言

4.2材料与方法

4.3结果与分析

4.4讨论

4.4本章小节

第五章结论与展望

5.1结论

5.2展望

参考文献

致谢

作者简历