新疆奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌生物学特性及基因分型研究

摘要

本实验用微生物学和分子生物学方法，对新疆部分地区奶牛场乳房炎病例中金黄色葡萄球菌的生化特性、抗药性、免疫原性、菌体蛋白和基因分型进行了初步研究。 研究结果表明：不同地区牛场检出的304份乳房炎奶样金黄色葡萄球菌的分离率为29.3％。TH-16S生化编码以733720型为主，占所有鉴定菌株的75％。药物敏感性试验表明，所实验菌株对头孢唑林钠、庆大霉素最为敏感，对环丙沙星、头孢拉定、丁胺卡那霉素亦具有良好的抑菌效果，而氨苄西林、青霉素、克林霉素等常用药物的抑菌效果较差。对不同牛场所分离的8个菌株进行免疫原性和抗原相关性测定，不同菌株的免疫原性存在差异，并存在广泛的交叉凝集。用聚丙烯酰氨凝胶电泳对所分离菌株的菌体蛋白进行分析，各菌菌体蛋白图谱相似，有41～52条蛋白条带，其分子量大小在16.7～118.4kDa。根据菌体蛋白图谱之间的差异，69株菌共分为6类。其中，A类和B类共58株，占实验菌株总数的84％，说明新疆地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌菌体蛋白具有较高的相似性。免疫印迹分析表明，所有实验菌株在35.4kDa、32.0kDa、17.7kDa存在共同性抗原。另外，部分菌株免疫印记图谱在28.7kDa处明显多出一条独特的条带，证明奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌菌株间确实存在抗原差异。用三个不同引物以RAPD方法对不同牛场分出的50株金黄色葡萄球菌进行扩增，确定新疆地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌14个基因型。上述工作为奶牛乳房炎疫苗研制中金黄色葡萄球菌疫苗菌株筛选提供了有益的技术资料。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

声明

前言

第一章文献综述

1.1奶牛乳房炎流行病学、病原学和防治综述

1.1.1奶牛乳房炎的流行情况

1.1.2引起奶牛乳房炎的病原微生物

1.1.3奶牛乳房炎的危害

1.1.4奶牛乳房炎免疫预防

1.2金黄色葡萄球菌综述

1.2.1金黄色葡萄球菌生物学特性

1.2.2金黄色葡萄球菌抗原结构和致病性

1.2.3金黄色葡萄球菌菌体蛋白及免疫分析

1.2.4金黄色葡萄球菌分型

第二章实验研究

2.1实验材料

2.1.1实验菌株与动物

2.1.2试剂与药品

2.1.3实验仪器

2.2实验方法

2.2.1奶样采集

2.2.2隐性乳房炎的检测

2.2.3金黄色葡萄球菌的分离

2.2.4生化鉴定

2.2.5分离菌株的致病性检测

2.2.6药物敏感试验

2.2.7奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌免疫原性测定

2.2.8奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌菌体蛋白分析

2.2.9金黄色葡萄球菌RAPD-PCR基因分型

2.3实验结果

2.3.1奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的生长特性

2.3.2分离菌株生化反应

2.3.3分离菌株的致病性

2.3.4分离菌株的药物敏感性

2.3.5分离菌株的免疫原性

2.3.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)

2.3.7免疫印记(Western-blot)分析

2.3.8基因分型结果

2.4讨论

2.5结论

参考文献

附录

致谢

作者简介