抗“腐皮综合症”刺参(Apostichopus japonicus)体腔液指标变化及抗病相关分子标记的研究

摘要

刺参(Apostichopus japonicus)是我国传统的名贵海产品，是海参种类中食用和药用价值最高的品种。目前我国已经形成了一个以山东、辽宁和河北沿海为养殖核心区，以南北接力形式延伸到闽浙沿海的海参增养殖产业群，是我国海水养殖单品种产值最高的种类，逐步发展成为第五次海水养殖浪潮主体。随着人工养殖的深入开展，刺参出现了种质退化等一系列问题，表现出生长缓慢，抗病能力较弱，病害频繁发生，养殖成活率低，严重影响了刺参产业的可持续发展。因此，开展抗病刺参的相关研究意义十分重大。本研究从刺参的体腔液指标和抗病相关分子指标两方面进行刺参抗病指标筛选，为抗病刺参选育和健康刺参苗种培育奠定基础。 通过对刺参体腔液占体重的比例、体腔液单次最大抽取量、体腔液安全抽取量的测定以及体腔液恢复的研究。结果表明：①小参、中参和大参体腔液占体重的百分比分别是26.88％、25.24％、30.98％。②小参、中参、大参体腔液单次最大抽取量占体重的百分比分别为3.27％、3.18％、2.57％。③不同规格的刺参体腔液单次安全抽取量为体重的1.5％以内。④刺参体腔液一次大量抽取后，其吸光值、总细胞浓度、颗粒细胞浓度和透明细胞-淋巴样细胞浓度四个指标在第6天恢复。 对用“腐皮综合症”致病菌蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)感染刺参的7个体腔液指标进行了测定。结果显示：①抗病刺参和易感刺参体腔液吸光值和颗粒细胞浓度在第10天差异显著(P<0.05)。②抗病刺参和易感刺参总细胞浓度和透明细胞-淋巴样细胞浓度在第5天差异显著(P<0.05)。③抗病刺参体腔液碱性磷酸酶活力在试验各天均保持较高水平，且在第10天与易感参有显著差异(P<0.05)；易感刺参体腔液酸性磷酸酶活力在第5天明显高于抗病刺参(P<0.05)，之后各天迅速降低，并显著低于抗病刺参(P<0.05)。④抗病刺参和对照组刺参超氧化物歧化酶活力各天始终无显著差异(P>0.05)，抗病刺参和易感刺参在第10天差异显著(P<0.05)。 利用RAPD和AFLP技术对抗病刺参种群和易感刺参种群进行了遗传差异分析。通过40个RAPD引物和96对AFLP引物对目的基因进行特异性扩增，依据特异性标记在两组刺参中出现的频率、变化规律和测序分析，共得到9个抗病相关候选分子标记(4个RAPD标记，5个AFLP标记)，其中正相关标记6个，负相关标记3个。

目录

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1.绪论

1.1海参细菌性疾病简介

1.1.1海参育苗期细菌性疾病

1.1.2海参保苗期及养成阶段细菌性疾病

1.2海参体腔液研究进展

1.2.1体腔液细胞分类

1.2.2体腔液免疫学研究进展

1.3 RAPD和AFLP技术在水产动物经济性状标记筛选中的应用现状

1.3.1 RAPD技术在水产动物经济性状标记筛选中的应用现状

1.3.2 AFLP技术在水产动物经济性状标记筛选中的应用现状

1.4结语

2.刺参体腔液三种基础指标的测定及体腔液细胞恢复状况的研究

2.1刺参体腔液三种基础指标的测定

2.1.1材料与方法

2.1.2试验结果

2.1.3讨论

2.2刺参体腔液细胞恢复状况研究

2.2.1材料与方法

2.2.2结果

2.2.3讨论

3.抗“腐皮综合症”刺参体腔液指标的研究

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2方法

3.1.3数据处理

3.2结果

3.2.1人工感染试验结果

3.2.2抗“腐皮综合症”刺参体腔液吸光值及各类细胞浓度变化

3.2.3抗“腐皮综合症”刺参体腔液三种非特异性免疫酶活力的变化

3.3讨论

4.刺参抗病相关候选分子标记研究

4.1材料

4.1.1样本来源

4.1.2主要试剂

4.1.3主要软件

4.2试验方法

4.2.1 DNA提取及浓度测定

4.2.2 RAPD技术筛选刺参抗病候选标记

4.2.3 AFLP技术筛选刺参抗病候选标记

4.2.4数据处理

4.3结果

4.3.1刺参基因组DNA提取结果

4.3.2 RAPD技术筛选刺参抗病候选标记

4.3.3 AFLP技术筛选刺参抗病候选标记

4.4讨论

5.结论

参考文献

附录

致谢

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