牛病毒性腹泻/粘膜病荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要

牛病毒性腹泻/粘膜病(Bovineviraldiarrhea/mucosaldisease,BVD/MD),由牛腹泻/粘膜病毒引起的,是黄病毒科、瘟病毒属的成员之一,在牛的病原学上具有很重要的地位。目前为止,还没有有效的预防和控制BVDV的措施。因此,建立高效快速的检测方法,对于该病的早发现,早防治具有重要作用。
　　本文根据BVDV5'-UTR区的高保守性的特点,通过引物、探针设计和反应条件的优化,分别建立了检测BVDV的通用型RT-PCR方法、通用型荧光定量RT-PCR方法、同时检测BVDVⅠ型和Ⅱ型病毒的双重荧光定量RT-PCR方法。其次,通过引物设计和搭桥法PCR扩增,获得BVDV内标荧光PCR扩增模板,并构建了含内标物的BVDV通用型荧光定量RT-PCR方法。上述方法具有较好的特异性、灵敏度与可重复性,内标物的构建还可对反应过程进行监测,确保检测结果的准确性。上述方法的建立,达到对该病快速、灵敏、准确检测的目的。

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英文缩略表

第1章 牛病毒性腹泻/黏膜病的研究进展

1.1 BVDV的简述

1.3 BVDV基因组结构特点

1.4 BVDV蛋白功能的研究

1.5 BVDV 流行病学分析1.5.1 BVDV传染源

1.6 BVDV检测技术介绍

1.7 本文的研究目的与意义

第2章 BVDV通用型RT-PCR方法的建立

2.1 材料

2.2 实验方法

2.3 结果

2.4 讨论

第3章 BVDV通用荧光定量RT-PCR方法的建立

3.1 材料

3.2 实验方法

3.3 结果与分析

3.4 讨论

第4章 BVDV分型双重荧光定量RT-PCR方法的建立与应用

4.1 材料

4.2 实验方法

4.3 结果与分析

4.4 讨论

第5章 含内标的荧光定量RT-PCR方法的建立与应用

5.1 材料

5.2 实验方法

5.3 结果与分析

5.7 讨论

第6章 结论

参考文献

致谢

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