进境向日葵有害生物风险分析及向日葵茎溃疡病菌快速检测技术研究

摘要

本文对进境向日葵有害生物进行了风险分析,并对向日葵茎溃疡病菌的生物学特性和PCR检测方法进行了研究,建立了该病菌常规PCR和实时荧光PCR检测方法。通过室内毒力的测定,为该菌的检疫处理提供了理论基础。
　　本文按照FAO的国际植物检疫措施标准第2号——有害生物风险分析准则,对进境向日葵进行了风险分析。通过风险评估,筛选出检疫性有害生物7个,其中真菌4个,病毒2个,杂草1个,即向日葵白锈病菌、向日葵茎溃疡病菌、向日葵黑茎病菌、向日葵黄萎病菌、向日葵环斑病毒、烟草环斑病毒、向日葵列当,除了向日葵茎溃疡病菌和向日葵黑茎病菌为高等风险外,其余风险均为中等。通过检疫审批、药剂拌种、入境口岸检疫和隔离试种等管理措施,可以将输入向日葵的风险降至可接受的水平。
　　依据风险分析结果,选取向日葵茎溃疡病菌(Phomopsis helianthi)进行深入的研究。为了建立常规的生物学检测方法,对该病菌的培养条件和生态适应性中的营养条件进行研究。在不同培养条件(包括培养基、碳源、氮源、温度、酸碱度、光照等条件)和营养条件下,对该菌培养7d,观察其生长状况并测量菌落直径大小。用SPSS12.0软件进行相应的计算处理、统计分析。该病菌在PDA、CMA培养基上生长较好,在改良的查彼培养基和WA培养基上生长较慢。该病菌能充分利用酵母膏和硝酸钾,在6℃～34℃温度范围内正常生长,最适生长温度为23℃～26℃。适宜生长酸碱度为pH4.0～11.0,最适酸碱度为pH5.0～10.0。在全光照培养条件下有利于菌丝的生长。
　　用真菌通用引物ITS4/ITS5对向日葵茎溃疡病菌进行PCR扩增,将扩增产物进行克隆、酶切分析和测序,并采用4种限制性内切酶对ITS区扩增产物进行酶切分析,为该菌的鉴定提供了一种方法。用DNAMAN软件分别设计出了检测该病菌的特异性引物PHDF1/PHDF2、PHDF3/PHDF4和TaqMan探针PHDF5,首次在国内建立了该病菌普通PCR和实时荧光PCR方法,通过体系优化和检测结果显示,这两对引物均可将向日葵茎溃疡病菌与其他拟茎点霉属的真菌区分开来。
　　在处理技术方面选用了8种低毒杀菌剂,采用菌丝生长抑制法对该病菌进行了室内毒力测定,结果表明70％甲基托布津、5%已唑醇、99%恶霉灵,对该病菌的EC50值明显低于75%百菌清、30%乙蒜素、80%多菌灵、70%丙森锌和20%乙酸铜。筛选出了3种药剂可作为防治该病害的有效杀菌剂。

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英文缩略词中文全称对照表

第1章 绪论

1.1 国内外向日葵病害发生基本情况

1.2 向日葵有害生物风险分析概述

1.3 向日葵茎溃疡病的概述

1.4 基于PCR的分子生物学技术在植物病原真菌分子检测中的应用

1.5 植物检疫除害处理技术研究进展

1.6 本研究的目的、意义和内容

第2章 进境向日葵有害生物风险分析

2.1 向日葵检疫性有害生物风险评估

2.2 向日葵有害生物风险管理

2.3 结论

第3章 向日葵茎溃疡病菌生物学特性研究

3.1 材料与方法

3.2 结果及分析

3.3 结论

第4章 向日葵茎溃疡病菌分子检测技术研究

4.1 材料与方法

4.2 结果与分析

4.3 结论

第5章 八种杀菌剂对向日葵茎溃疡病菌的室内毒力测定

5.1 材料与方法

5.2 结果与分析

5.3 结论

第6章 结论与讨论

6.1 进境向日葵有害生物风险分析

6.2 向日葵茎溃疡的生物学特性研究

6.3 向日葵茎溃疡病菌的分子快速检测技术

参考文献

致谢

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