大流行H1N1和季节性H1N1流感病毒的重配研究

摘要

目前,感染人类的流感病毒主要包括H1N1和H3N2流感病毒,其流行特征具有明显的季节性,一般称为季节性流感病毒。大流行H1N1流感病毒和季节性H1N1流感病毒的共存可能会导致其基因组的重配,产生高致病性的重配毒株,给公共健康带来威胁。
　　为了探讨大流行甲型(H1N1)流感病毒和季节性流感病毒H1N1基因重配的风险,本研究对大流行H1N1和季节性H1N1流感病毒的重配进行了研究。首先,利用流感病毒反向遗传学方法将流感病毒的8个片段的全长片段克隆至含有polI-polI双向表达系统的PHW2000表达载体中,构建2009大流行H1N1流感病毒的8个全长表达质粒。由于血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是流感病毒的两个主要的保护性抗原蛋白和流感病毒重配的主要的靶标,因此我们通过8质粒转染系统拯救出了联合表达2009大流行H1N1流感病毒的HA和NA的rCA07/PR8及分别表达2009大流行H1N1流感病毒的NA或HA的r6CANA/PR8、r4CAHA/PR8三株重配流感病毒。
　　在此基础上,进一步对重配病毒的体外生物学特征进行了观察。通过在MDCK细胞上对重配流感病毒的空斑形态、大小,病毒培养滴度,病毒的生长曲线的观察,表明联合表达HA和NA的重配流感病毒在体外的复制能力与野生型流感病毒无明显差异,而只表达HA或NA的重配流感病毒相比于野生型流感病毒在MDCK细胞上的复制能力降低。
　　为了研究重配病毒的致病性特征,我们将重配病毒分别感染BALB/c成年小鼠,在BALB/c小鼠体内通过测定小鼠肺部病毒载量,小鼠MLD50,MID50,小鼠肺指数,小鼠肺部病理损伤观察等对重配流感病毒的生物学特性进行了鉴定。我们的研究发现联合表达2009大流行H1N1流感病毒的HA和NA基因和只表达2009大流行H1N1流感病毒HA基因的重配流感病毒在小鼠的肺部病毒载量显著高于野生型的母本流感病毒,其LD50和MID50均显著低于野生型的季节性H1N1流感病毒,其对小鼠肺部造成严重的损伤。
　　我们的研究结果表明:1,2009甲型H1N1的HA、NA可与季节性H1N1发生重配;2,HA/NA的重配可增强病毒在小鼠肺组织中的增殖水平和病理损伤,这种增强作用主要是2009甲型H1N1的HA介导的。这提示2009年甲型H1N1和季节性H1N1的重配病毒存在致病性增强的风险,可能对人类生命健康造成潜在的威胁。此外,本研究也为研究流感病毒致病机制奠定了基础。

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第1章 综述

1.1流感病毒的分子生物学

1.2 流感病毒的遗传变异

1.3 流感病毒的反向遗传学

1.4 本研究的目的和意义

第2章 H1N1(2009)与季节性H1N1重配病毒的拯救与鉴定

2.1 材料

2.2方法

2.3 结果

2.4 讨论

第3章 拯救病毒生物学特性的鉴定

3.1 材料

3.2方法

3.3 结果

3.4 讨论

总结

参考文献

硕士期间发表的文章

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