几种方法对非禽源生物制品中外源病毒检测的研究

摘要

《2010版中华人民共和国兽药典》规定非禽源外源病毒检验中，选择细胞培养被检样品14日后要用致细胞病变检测、红细胞吸附检测、荧光抗体检测三种方法检测样品中是否污染外源病毒，如检验中出现细胞病变、红细胞吸附、特异性荧光任意一种现象则判该产品有外源病毒污染，不合格。本实验是为了提高实验的准确度及在判断出产品不合格的基础上进一步明确被污染病毒的种类，从而有目的的防治外源病毒污染而做的研究。
　　致细胞病变(CPE)实验中，我们用6种生产细胞接种8种生产或检验所需的病毒后进行培养和观察，结果出现CPE判断产品不合格（药典规定）后，还能确定:在Vero产生CPE的病毒有PPRV、PRV、GTPV、犬副流感病毒;在PK15产生CPE的有PRV、PPV;在羊睾丸细胞上产生CPE的有PPRV、PRV、GTPV;在ST细胞上产生CPE的有PRV;在BHK21上产生CPE的有PRV、FMDV; CSFV没有产生CPE的细胞。检验时如出现细胞病变，我们可确定病毒种类。
　　红细胞吸附实验是对红细胞产生吸附作用的病毒进行的检测。我们选择5种病毒分别接种4种细胞，挑选出病毒易感细胞。结果为在PK15细胞上有红细胞吸附作用的是PPV，在羊睾丸细胞上有红细胞吸附作用的是GTPV，在Vero上有红细胞吸附作用的是CPIV。这样，可以确定引起红细胞病变的病毒种类。
　　荧光抗体检测法是通过荧光的方法用已知抗体检测样品中是否含有对应抗原的检测[8]。市面上购买的荧光一抗、二抗规定的稀释比例中，一些比例观察荧光时往往无荧光或荧光效果差。本实验对细胞浓度、一抗浓度、二抗浓度对荧光效果的影响做比较，得出最佳比例:PPV染色一抗1∶800-1∶900、二抗1∶500时荧光片观察效果最佳;CSFV染色一抗1∶4、二抗1∶100时观察效果最好;BVDV染色一抗1∶150-1∶200、二抗1∶200时观察效果最佳。可制备最优的荧光片，更好的观察实验结果。

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摘要

英文缩略词语

第1章 非禽源生物制品外源病毒检测的介绍

1．1 非禽源生物制品外源病毒检验的有关规定

1．2 外源病毒检测的意义

1．3 外源病毒污染的主要来源

1．4 非禽源外源病毒污染主要检查的材料

1．5 本公司需检外源病毒的产品、原材料

1．6 非禽源外源病毒检测检查技术依据

第2章 几种方法检测非禽源生物制品中外源病毒的探索

2．1 通过致细胞病变筛选能使细胞产生CPE的病毒

2．2 红细胞吸附的检验研究

2．3 荧光抗体染色法

第3章 结论

参考文献

致谢

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