八肽胆囊收缩素对γ-氨基丁酸介导的大鼠DRG神经元膜去极化的调制作用

摘要

胆囊收缩素(cholecystokinin，CCK)是一种脑肠肽，不仅存在于消化系统，在中枢神经系统也有广泛分布。在中枢神经系统中，CCK主要以硫酸化的八肽胆囊收缩素(sulfatedcholecystokininoctapeptide，CCK-8S)作为活性成分发挥其生物学效应。CCK-8S参与许多重要的生理和病理生理过程，如行为学、焦虑、学习/记忆过程、神经源性痛等。CCK-8S是目前发现最强的内源性抗阿片物质。阿片肽可增强γ-氨基丁酸(GABA)介导的“突触前抑制”的作用，而CCK-8S可对抗阿片肽的这一作用。因此我们应用细胞内微电极技术观察预加CCK-8S对Wistar大鼠背根神经节(dorsalrootganglion，DRG)神经元膜电位的影响以及CCK-8S对GABA介导的DRG神经元去极化的调制作用。所得结果如下： 1、CCK-8S对DRG神经元膜电位的影响灌流CCK-8S(10-8～10-6mol/L)可以使部分DRG神经元(45.6％，26/57)引起具有浓度依赖性的DRG神经元去极化。此去极化可被CCK-A受体拮抗剂prolumide(10-4mol/L，n=8)所阻断，而CCK-B受体拮抗剂LY225910(10-4mol/L，n=9)对CCK-8S介导的去极化没有影响。 2、GABA对DRG神经元膜电位的影响实验中共检测了185个细胞，大多数(90.2％，167/185)对GABA敏感。灌流GABA(10-6～10-3mol/L)可产生浓度依赖性的去极化，且具有明显的去敏感现象。GABA介导反应的最低浓度是10-6mol/L，Kd值是3×10-5mol/L，最大反应浓度是3×10-4mol/L。此去极化可被GABA-A受体激动muscimol(10-4mol/L，n=10)所模拟。GABA-A受体拮抗剂bicuculline(10-4mol/L，n=7)可阻断GABA和muscimol介导的去极化反应(10-4mol/L，n=10)。 3、CCK-8S抑制GABA介导的DRG神经元去极化反应预灌流CCK-8S2分钟后，CCK-8S对GABA介导的去极化具有明显的调节作用，其中在86个神经元(84.3％，86/102)上发现CCK-8S对GABA介导的去极化产生抑制效应。预灌流CCK-8S(10-7mol/L)使GABA量效曲线右移，当CCK-8S存在时曲线的Kd值大约是3×10-5mol/L。无论CCK-8S存在与否，GABA量效曲线中的最低浓度、Kd值、最高浓度的差异无统计学意义。CCK-8S对GABA去极化的抑制作用与CCK-8S的浓度有关，当CCK-8S浓度为3×10-9、10-8、3×10-8、10-7、3×10-7和10-6mol/L时，对GABA(10-4mol/L)去极化的抑制作用分别为10.7％±4.2％、17.8％±5.0％、39.4％±4.4％、47.8％±4.2％、56.3％±4.6％、58.8％±6.2％(n=11～21)。 4、CCK-8S抑制GABA介导的DRG神经元去极化反应的时间过程预灌流CCK-8S2分钟后，CCK-8S抑制GABA去极化的作用最强，之后随间隔时间的增长CCK-8S的抑制作用逐渐减弱，当间隔时间超过16分钟后，CCK-8S对GABA去极化的抑制作用基本消失。 5、CCK-8S通过CCK-B受体抑制GABA介导的DRG神经元膜去极化反应当预灌流CCK-B受体拮抗剂LY225910(10-5mol/L，n=6)后，CCK-8S对GABA的抑制作用消失。而预灌流CCK-A受体拮抗剂prolumide(10-4mol/L，n=7)后，抑制现象仍然存在。在给予CCK-8S的57个细胞中，有24个神经元CCK-8S不仅引起DRG神经元膜去极化，而且抑制GABA介导的DRG膜去极化反应。由此我们推测CCK-A和CCK-B受体共存于DRG神经元。 6、CCK-8S抑制GABA介导的DRG神经元去极化反应的细胞内机制为了揭示CCK-8S对GABA介导的DRG神经元去极化的抑制作用的细胞内机制，我们给予PLC拮抗剂U73122、钙离子螯合剂BAPTA-AM、PKC拮抗剂chelerythrine、PKA拮抗剂H-89、NO合酶抑制剂L-NAME。U73122(10-6mol/L，n=6)、chelerythrine(10-6mol/L，n=8)、BAPTA-AM(10-4mol/L，n=7)、L-NAME(10-4mol/L，n=7)可以使CCK-8S对GABA去极化的抑制作用基本消失，而H-89(10-6mol/L，n=9)则不影响CCK-8S对GABA去极化的抑制作用。 结果提示：CCK-8S结合CCK-B受体进一步激活细胞内PLC-Ca2+-PKC通路从而抑制GABA-A受体的功能.CCK-8S通过抑制由GABA介导的“突触前抑制”从而增强初级感觉信息的传递(包括痛觉)，参与脊髓水平初级感觉信息的调制。

目录

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List of Abbreviations

前言

第一章材料与方法

第二章实验结果

第三章讨论

第四章结论与展望

参考文献

综述H+-离子门控通道的研究进展

作者简历

致谢

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