人类Neuritin在原核细胞中的克隆、表达及相关生物学功能的研究

摘要

神经营养因子是一类促进神经细胞存活、生长、分化的多肽分子，在神经系统发育、分化和损伤修复过程中起着非常重要的作用。Neuritin是一种新近发现的与神经可塑性相关的神经营养因子。研究表明Neuritin在神经再生的领域中具有较广泛的生物学活性，可促进神经突起的快速生长和分支，并参与调节神经元突触活动，因而对多种因素引起的神经系统损伤后轴突和突起的生长具有潜在的治疗与预防作用。由于Neuritin体内含量低，提取与纯化困难，难以满足研究和临床治疗需要，因此以基因工程的方法制备重组人的Neuritin将是获取Neuritin有效的手段。本论文就Neuritin在原核表达、纯化及生物学活性测定等进行了研究，这为临床上用基因治疗神经系统疾病奠定了实验基础。 本实验是以neuritincDNA为模板，PCR扩增neuritin基因后，克隆于原核表达载体pET32a，分别用NocI和NotI双酶切鉴定。鉴定正确的重组子pET32-neuritin转化大肠杆菌BL21，测序正确的阳性转化子用IPTG诱导后获得了融合Neuritin蛋白；SDS-PAGE分析表明：大肠杆菌表达菌株经IPTG诱导后，可表达分子量为30kD的融合Neuritin蛋白质并且在4小时时表达量最大；Westemblot检测表明该表达产物具有Neuritin免疫活性；经Ni-NTA纯化系统及尿素分步透析，表达蛋白得到了有效的纯化和复性。最后，对重组Neuritin的活性进行鉴定。结果表明：与阴性和空白组对照后，大肠杆菌表达的融合的Neuritin在体外能促进培养的pc12细胞和鸡胚背根神经节神经突起的生长并能延长它们的存活时间。 本研究首次报道了重组人Neuritin在大肠杆菌的表达以及在体外实验中促进鸡胚神经节和pc12细胞突起的生长，这项工作为神经营养因子Neuritin在神经系统疾病的治疗的应用中奠定了良好的基础。

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英文缩略词表

前言

第一部分：人类Neuritin基因的原核表达载体的构建

第二部分重组蛋白的表达、纯化及鉴定

第三部分：重组蛋白生物学活性的测定

结论

展望

参考文献

文献综述

附录

致谢

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