牛羊体外受精技术条件优化和牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究

摘要

本试验探讨了精卵共培养时间和卵泡液对牛体外受精效果的影响,以及卵泡液、精卵共培养时间、精卵共培养液量、颗粒细胞层数以及季节对羊体外受精效果的影响,进-步优化了牛羊体外受精技术条件；本试验还对冷冻保护剂、冷冻方法、冷冻载体以及胚胎不同发育阶段的冷冻效果等进行了研究。 牛体外受精技术条件优化的研究： (1)受精10 h组的卵裂率和囊胚率均优于受精7h组,其中卵裂率差异显著,囊胚率差异不显著； (2)在成熟培养液中添加BFF组和SFF组的卵裂率分别为75.41％和63.01％,差异显著。 牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存的研究： (1)EG组与EG+DMSO组的形态完整率差异不显著；EG组与对照组的孵育率差异显著,虽然EG+DMSO组的孵育率高于EG组,但差异不显著； (2)早期囊胚经OPS法玻璃化冷冻和程序化冷冻法冷冻的孵育率均低于对照组,分别为30.23％、35.56％和39.34％,但差异不显著,说明采用OPS进行牛早期囊胚玻璃化冷冻能取得与程序化冷冻相当的效果； (3)GMS组与0.25ml细管组的形态完整率差异极显著,OPS组与0.25ml细管组的形态完整率差异显著,但GMS组与OPS组间的差异不显著,说明0.25ml细管的玻璃化冷冻效果欠佳,OPS和GMS的早期囊胚玻璃化冷冻效果相当,可用OPS取代GMS； (4)桑甚胚组与囊胚组的形态完整率差异不显著；桑堪胚组与对照组的孵育率差异显著,桑堪胚组与囊胚组差异显著。 (5)桑椹胚组与早期囊胚组形态完整率差异不显著；桑椹胚组冻前与冻后平均活力差异显著,早期囊胚组冻前与冻后平均活力差异显著,孵化囊胚组冻前与冻后平均活力差异显著。 绵羊体外受精技术条件优化的研究： (1)在成熟培养液中添加SFF组和BFF组的卵裂率分别为65.23％和60.43％,差异不显著；囊胚率分别为26.16％和17.11％,差异显著； (2)受精22 h组、18 h组和12 h组的卵裂率分别为64.85％、54.39％和48.72％,受精22h组和18 h组间差异显著,受精22 h组和12 h组间差异极显著； (3)精卵共培养液量为100 ul组的卵裂率和囊胚率均优于70 ul组和200ul组,但差异均不显著； (4)带有1层～3层颗粒细胞的卵母细胞进行IVF的效果优于0层组,两者的卵裂率和囊胚率均显著；3层～5层组的卵裂率和囊胚率也优于0层组,但两者差异不显著； (5)秋季的卵裂率和囊胚率均高于夏季,差异显著,但秋季与春季相比差异均不显著。通过上述试验,本实验室已建立了牛体外受精技术,已初步建立了绵羊体外受精技术和牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存技术体系。

目录

文摘

英文文摘

前言

声明

文献综述 第一章牛羊体外受精技术的研究进展

1.体外受精技术的研究进展

1.1卵母细胞的体外成熟（IVM）

1.2精子体外获能和体外受精(IVF)

1.3早期胚胎的体外培养（IVM）

1.4展望

文献综述 第二章牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究进展

2.胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究进展

2.1胚胎玻璃化冷冻保存的意义

2.2胚胎冷冻保存的发展概况

2.3胚胎玻璃化冷冻保存机理

2.4胚胎玻璃化冷冻方法

2.5展望

试验研究 第三章 牛体外受精技术条件优化的研究

1材料和方法

1.1仪器设备

1.2试剂

1.3卵泡液的制备

1.4卵巢与卵母细胞的采集和卵母细胞体外成熟培养

1.5精子获能处理和卵母细胞体外受精

1.6早期胚胎体外培养

1.7实验设计

1.8统计分析

2结果与分析

2.1精卵共培养时间对卵母细胞体外受精的影响

2.2牛羊卵泡液对牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

3讨论

3.1精卵共培养时间对卵母细胞体外受精的影响

3.2卵泡液对卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

4结论

试验研究 第四章牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存的研究

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

1.3试验设计

1.4统计分析

2结果与分析

2.1冷冻保护剂对OPS法玻璃化冷冻胚胎发育率的影响

2.2冷冻方法对体外受精胚胎发育率的影响

2.3冷冻载体对OPS法玻璃化冷冻胚胎发育率的影响

2.4不同发育阶段牛体外受精胚胎的OPS法玻璃化冷冻

2.5不同发育阶段体外受精胚胎的活力检测

3讨论

3.1冷冻保护剂对OPS法玻璃化冷冻胚胎发育率的影响

3.2冷冻方法对体外受精胚胎发育率的影响

3.3冷冻载体对OPS法玻璃化冷冻胚胎发育率的影响

3.4不同发育阶段牛体外受精胚胎的OPS法玻璃化冷冻

3.5不同发育阶段体外受精胚胎的活力检测

4结论

试验研究 第五章绵羊体外受精技术条件优化的研究

1材料和方法

1.1仪器设备

1.2试剂

1.3卵泡液制备方法

1.4卵巢与卵母细胞采集和卵母细胞体外成熟培养

1.5精子获能处理和卵母细胞的体外受精

1.6早期胚胎的体外培养

1.7实验设计

1.8统计分析

2结果与分析

2.1牛羊卵泡液对绵羊卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

2.2精卵共培养时间对卵母细胞体外受精的影响

2.3精卵共培养液量对卵母细胞体外受精的影响

2.4颗粒细胞层数对卵母细胞体外受精的影响

2.5季节对卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

3讨论

3.1卵泡液对卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

3.2精卵共培养时间对卵母细胞体外受精的影响

3.3精卵共培养液量对卵母细胞体外受精的影响

3.4颗粒细胞层数对卵母细胞体外受精的影响

3.5季节对卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

4结论

参考文献

附图

致 谢

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