小鼠体外受精胚胎OPS法玻璃化冷冻保存的研究

摘要

本实验对小鼠胚胎进行了OPS法玻璃化冷冻保存,旨在系统地研究两步OPS法冷冻对不同发育阶段小鼠体外受精胚胎体内外发育率的影响.所用溶液是10％EG+10％DMSO和EDFS30.胚胎两步OPS法冷冻是将体外受精而来的各发育阶段胚胎先于10％EG+10％DMSO溶液中预处理30s,然后再移入玻璃化溶液(EDFS30)中处理25s,以OPS为承载器投入液氮中.胚胎冻融后,通过观察其形态正常率、囊胚发育率、扩张囊胚发育率、孵化囊胚发育率和移植后产仔率、妊娠率来综合判断其体内外发育能力.结果表明:原核胚解冻后囊胚率和孵化囊胚率(40.0％和32.7％)低于其它各个发育阶段的胚胎,并且与对照组有显著差异.2-细胞,4-细胞,8-细胞,桑椹胚冷冻保存后其囊胚率和孵化囊胚率在不同发育阶段无显著差异(P＜0.05).而囊胚的冻融后,其孵化率显著低于对照组.各个发育阶段中,冷冻胚胎移植后产仔率最高的是2-细胞胚(57.1％),与对照组(61.6％)差异不显著(P＞0.05).以上数据表明,两步OPS法玻璃化冷冻方案适合于2-细胞至桑椹胚各阶段体外受精胚胎的冷冻保存.