RhoA在大鼠脊髓损伤后胶质细胞活化增殖中的作用

摘要

目的：观察脊髓损伤后损伤灶附近神经元的病理变化及胶质细胞增殖活化情况；观察RhoA在大鼠脊髓损伤后的表达及RhoA在神经元，小胶质细胞、星形胶质细胞、NG2胶质细胞中的表达以及在神经元的死亡和胶质细胞增生活化中可能的作用。
　　方法：选择SPF级雄性Wistar大鼠60只，体重约250-300g，所有大鼠在手术前后均自由进食水。大鼠随机分为两组（n=30）：手术组和假手术组：手术组用改良Allen's打击法制作脊髓损伤模型（选择大鼠T10部位脊髓）；假手术组只手术切除椎板，不损伤脊髓。术后给予腹腔注射青霉素预防感染。分别于术后3d，7d，30d每组随机取5只大鼠，取损伤灶附近脊髓组织（T9-11部位），用组织病理检查观察损伤部位脊髓组织病理学改变；用苏木精染色观察脊髓损伤部位神经元死亡及胶质细胞增生情况；WesternBlot检测脊髓损伤后RhoA的表达，免疫组化双标方法观察RhoA在神经元和胶质细胞中的表达和分布。
　　结果：使用胶质纤维酸性蛋白荧光染色显示正常脊髓组织结构连续，脊髓损伤后损伤部位组织出现部分坏死，且以损伤灶为中心形成空洞。苏木精染色显示大鼠脊髓损伤后，损伤灶周围神经元出现进行性坏死。另外使用GFAP、CD11b和NG2作为星形胶质细胞、小胶质细胞和NG2胶质细胞的特异性标记物，免疫荧光单标显示在正常脊髓组织中这三种胶质细胞表达较少，脊髓损伤后3d到30d，损伤灶附近三种胶质细胞的特异性标记物表达上调，脊髓损伤后3d可见，7d达高峰，持续至第30d（P<0.05）。免疫荧光双标（RhoA/Neun、RhoA/GFAP、RhoA/CD11b和RhoA/NG2）在激光共聚焦荧光显微镜下显示正常脊髓组织神经元中RhoA表达量少，脊髓损伤后损伤灶附近残存的神经元以及增生的星形胶质细胞、小胶质细胞RhoA表达均明显升高，而NG2胶质细胞未见RhoA表达。Westernblot提示对照组脊髓中RhoA仅有少量表达，脊髓损伤后3d可见脊髓中RhoA表达升高，7d达高峰,持续高表达至实验结束（P<0.05）。
　　结论：RhoA在损伤灶残存神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞中大量表达，可能参与了神经元的死亡和胶质细胞增殖活化,并形成胶质瘢痕，促进脊髓损伤后的解剖修复，不利于脊髓损伤后功能恢复，抑制脊髓损伤后脊髓中RhoA的表达，可能是脊髓损伤治疗的一个行之有效的新措施。

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缩略词表

引 言

材料与方法

2.1 实验动物

2.2 主要仪器

2.3 抗体、试剂及配制方法

2.4 实验分组

2.5 标本处理

2.6 苏木精染色

2.7 免疫荧光染色

2.8 Western Blot检测

2.9 统计学分析

结 果

3.1 胶质纤维酸性蛋白（GFAP)的免疫荧光染色观察大鼠脊髓损伤模型病灶部位的病理改变

3.2 苏木精染色观察大鼠脊髓损伤后神经元死亡情况

3.3 免疫荧光染色观察胶质细胞活化增殖

3.4 RhoA和Neun免疫荧光双标观察RhoA在大鼠脊髓神经元中的表达

3.5 免疫荧光双标观察RhoA在大鼠胶质细胞中的表达

3.6 Western Blot 检测RhoA蛋白的表达

讨 论

参考文献

文献综述

1 RhoA-Rock通路组成及其作用

2 影响轴突生长的抑制性因子对RhoA/ROCK通路的影响

3 干预RhoA/ROCK通路及治疗结局

4 结束语

参考文献

致谢

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