绵羊传染性胸膜肺炎与基因组DNA甲基化的关系

摘要

绵羊支原体性肺炎是一种慢性呼吸道疾病,是由绵羊肺炎支原体( Mycoplasma ovipneumoniae,MO)所引起的。该病主要症状是咳嗽、喘气、渐进性消瘦以及肺间质增生性炎症等。绵羊支原体肺炎的控制和消灭是比较困难的,因为绵羊感染支原体肺炎后呈亚急性表现,加之康复绵羊还可成为长期携带病菌者,所以该病给许多国家的养羊业造成重大损失。新疆是我国饲养羊只数量较多省区,上世纪九十年代前鲜见有该病的报道,近年来由于新疆地区引种和集约化养羊的发展需要,新疆地区爆发了较大规模绵羊支原体肺炎,使新疆畜牧业的生产与发展受到严重的影响。
　　目前研究DNA甲基化与病原感染性疾病的报道很少,为了从自身的角度来提高绵羊对传染性胸膜肺炎的抗感染能力,本文章优化了适合检测绵羊这一物种的全基因组甲基化的方法:MSAP(Methylation Sensitive Amplification Polymorphism)技术,以绵羊(以湖羊为主)为实验材料,对MSAP技术中的关键因素进行优化筛选,经过不同因素水平摸索,在该优化体系下选用4对引物通过8％的鲨鱼齿测序胶聚丙烯凝胶电泳对绵羊DNA进行甲基化模式分析,获得了清晰、重复性好的银染图谱。表明该体系可用于绵羊DNA甲基化的相关性分析实验。
　　通过对 MSAP(甲基化敏感性多态性)方法进行实验优化后,对20头患病绵羊和20头正常绵羊基因组 DNA的甲基化与传染性胸膜肺炎关联性初步分析实验。以绵羊在传染性胸膜肺炎患病前后的全基因组 DNA为研究对象,经过同裂酶 HpaII和MspI对其进行双酶切,最后通过测序胶聚丙烯凝胶电泳处理,从16对MSAP选择性引物组合中挑选出预实验中结果比较清晰4对引物组合来进行绵羊患病前后甲基化变化的评估。MSAP技术通过改良后比较适合全基因组DNA的甲基化检测,测序胶聚丙烯凝胶电泳能够得出清晰的实验图谱,符合实验的要求。通过统计学分析得出患病绵羊甲基化水平普遍高于非患病绵羊的甲基化水平,同时甲基化多态性也随之升高。
　　结果表明传染性胸膜肺炎的感染与否,与绵羊的甲基化程度有一定的关联。这对研究疾病与动物自身表观遗传之间关联性起到一定的参考意义。推测绵羊传染性肺炎的发生和发展与其基因组DNA甲基化具有关联性,可以从甲基化的角度来探讨宿主在预防和治疗疾病等方面的相关问题。

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引言

第一章 文献综述

1．肺炎支原体在其宿主中的研究状况

1.1 绵羊肺炎支原体（M.O）在分类学地位中的研究

1.2支原体肺炎在宿主中流行病学的研究

2. 表观遗传学的研究进展

2.1表观遗传与疾病的研究

2.2 甲基化的研究技术

3．本研究的目的及意义

4. 技术路线

第二章:绵羊MSAP技术体系的建立和优化

1．材料与方法

1.1材料

1.2 实验仪器

1.3 方法

2 结果：

3 结论

第三章：感染传染性胸膜肺炎绵羊与正常绵羊其机体基因组DNA甲基化的区别分析

1．材料与方法

1.1材料

1.2实验仪器

1.3 方法

2 结果

2.1 绵羊肌肉组织基因组DNA的提取

2.2 正常和患病绵羊基因组DNA甲基化比对分析

3 结论

第四章：讨论与展望

参考文献

附录

致谢

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