Neuritin对Neuralized与Notch通路配体结合及Notch途径下游靶基因的影响

摘要

目的:探讨Neuritin对细胞中Neuralized与Notch通路的配体结合以及对Notch通路的受体及下游靶基因的影响,明确Neuritin通过Neuralized调节Notch通路的的机制。
　　方法:
　　(1)探讨Neuritin是否通过对Neuralized的影响调节Notch通路配体Jag1:利用免疫荧光、免疫共沉淀以及Western-Blot技术观察过表达Neuritin以及在RNA干扰下降低Neuralized后Jag1表达水平的变化;
　　(2)探讨不同浓度Neuritin作用下Notch信号通路中Jag1与Neuralized结合量的变化:利用免疫共沉淀及Western-Blot首先确定各质粒转染的最佳浓度以及Jag1与Neuralized结合的最佳时间,从而观察不同浓度Neuritin作用下Notch信号通路中Jag1与Neuralized结合量的变化;
　　(3)探讨Neuritin对细胞中Notch通路受体胞内区(NICD)、下游靶基因HES1蛋白表达水平的影响:利用免疫共沉淀及Western-Blot技术检测在Neuritin作用下Notch信号通路受体胞内区(NICD)、下游靶基因HES1蛋白表达水平的变化。
　　结果:
　　(1)利用免疫共沉淀以及Western-Blot技术检测Neuritin过表达能增加细胞中Jag1表达水平;利用RNA干扰技术降低Neuralized表达后,细胞中Jag1的表达水平有明显升高;
　　(2)浓度梯度增加的Neuritin能使Notch配体Jag1表达呈梯度增加,并使Neuralized(酶)与Jag1(底物)的亲和力逐渐降低;
　　(3)Neuritin在降低细胞中Neuralized与Jag1的亲和力的同时,降低了Notch受体胞内区,Notch途径下游靶基因HES1的表达。
　　结论:
　　(1)Neuritin对Notch信号途径配体Jag1的影响是受Neuralized介导的;
　　(2)Neuritin通过影响Neuralized与Jag1的结合,从而抑制了Neuralized介导的Notch信号途径配体Jag1蛋白的泛素化及内吞;
　　(3)Neuritin能部分下调Notch信号通路受体NICD及其下游靶基因HES1的表达。

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主要符号、缩略语、术语注释说明表

前言（Introduction）

材料（Materials）

1 细胞

2 菌株与质粒

3 主要试剂

4 主要试剂配制

5 主要仪器设备：

方法（Methods）

1 质粒制备

2 细胞培养

3 Neuralized siRNA表达载体的构建及对细胞中Neuralized表达的影响

4 Neuritin对细胞中Neur与Notch通路的配体Jag1结合的影响以及Notch信号通路的影响

结果（Results）

1 Neuritin对Notch信号途径配体Jag1的表达水平的影响

2. Neuritin对Neuralized与Jag1结合的影响

3. Neuritin 通过影响Neuralized与Jag1的结合，对 Notch通路受

讨论(Discussion)

1 需转染质粒测序及鉴定

2 探讨Neuritin是否是通过Neuralized影响细胞内Jag1的表达水平

3 不同浓度的Neuritin作用下，Neuralized与Jag1亲和力的变化

4 Neuritin对Neur介导的Notch通路的配体及下游靶基因的影响：

结论

参考文献

综述

参考文献

致谢

作 者 简 历

石河子大学硕士研究生学位