职业性噪声聋工人血清miRNAs的表达差异分析

摘要

实验目的：研究职业性噪声聋工人与听力正常工人之间血清中microRNAs(miRNAs)的表达差异。通过实验筛选并验证表达差异性miRNAs，并对其进行靶基因的预测和验证，分析职业性噪声聋致病机理，为后续的研究提供实验数据的支持。
　　实验方法：1.从病人血样标本中分离出300-500μL的血清，并对其进行编号、记录和分装，并在-80℃冰箱进行长期保存。之后建立血液样本信息数据库，并从数据库中筛选后续实验所需的样本。2.对血清样本进行miRNAs的分离与纯化。将提取出的总miRNAs用分光光度计进行质量检测，确定浓度和总量是否能够进行miRNAs的芯片杂交实验。3.进行miRNAs标记反应体系的准备、10× Blocking Agent的配制、杂交样品的准备、杂交混合液的配制、芯片杂交、芯片洗涤、芯片扫描、芯片数据提取等操作流程，完成miRNAs芯片实验。并通过图表对miRNAs杂交实验结果进行评价。最终找出差异性miRNAs。4.对芯片杂交实验的结果进行荧光定量PCR的验证，分析结果的可信度。再将筛选出的miRNAs进行靶基因的预测，并验证其对靶基因表达的影响。
　　结果：1.所有血液样本均已提取血清，并进行记录、编号及保存。建立血样数据库，在数据库中筛选出需进行后续实验的血清样本共6个，其中对照组3个，耳聋组3个。2.经过对实验所得miRNAs进行质量检测，耳聋组（编号1-3）和对照组（编号1-3）样本的miRNAs浓度及质量达到芯片杂交实验的标准。3.从6个样本的质量检测结果来看样本的完整性和纯度均符合实验要求。通过分析miRNA芯片杂交实验结果，共筛选出8个差异性miRNAs，它们是hsa-miR-1229-5p，hsa-miR-3162-5p，hsa-miR-4459， hsa-miR-483-5p，hsa-miR-6087，hsa-miR-6088，hsa-miR-638和hsa-miR-4484。4.荧光定量PCR的验证结果表明，在所选耳聋组样本中hsa-miR-1229-5p和hsa-miR-483-5p这两条miRNAs的表达量均高于对照组。对它们的靶基因进行预测，其中hsa-miR-1229-5p可能的靶基因为ATG101，MAPK1，SLC12A6，SLC25A24，SLC30A8和SLC9C1， hsa-miR-483-5p可能的靶基因为SRF和MAPK3。经定量PCR结果验证，hsa-miR-1229-5p的靶基因为MAPK1，SLC12A6，SLC25A24和SLC30A8，hsa-miR-483-5p的靶基因为SRF。
　　结论：1.芯片杂交结果表明，从6个样本中共筛选出8个差异性miRNAs，它们是hsa-miR-1229-5p， hsa-miR-3162-5p， hsa-miR-4459， hsa-miR-483-5p， hsa-miR-6087， hsa-miR-6088，hsa-miR-638，hsa-miR-4484。2.经过验证发现职业性噪声聋工人血清中hsa-miR-1229-5p，和hsa-miR-483-5p的表达量均高于对照组。靶基因的预测结果及验证表明，hsa-miR-1229-5p的靶基因为MAPK1，SLC12A6，SLC25A24和SLC30A8，hsa-miR-483-5p的靶基因为SRF。

目录

声明

前言

第一部分 血液样本的处理与筛选

1 实验材料与仪器

2 实验方法与步骤

3 血液样本的筛选

4 结果

5 讨论

6 结论

第二部分 miRNAs的提取、纯化和质量分析

1 实验材料与仪器

2 实验方法与步骤

3 结果

4 讨论

5 结论

第三部分 miRNAs芯片杂交实验

1 实验材料与仪器

2 实验方法与步骤

3 结果

4 讨论

5 结论

第四部分 miRNAs芯片杂交结果验证与靶基因预测

1 实验材料与仪器

2 试验方法与步骤

3 结果

4 讨论

5 结论

6 小结

参考文献

文献综述:小分子RNA相关疾病的治疗与预防进展

致谢

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