鸡沙门氏菌病检测方法的建立及初步应用

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Abstract

主要缩写词表

引 言

第一章 文献综述

鸡沙门氏菌病检测方法的研究进展

1 沙门氏菌概括

1.1 沙门氏菌病原特征

1.2 流行病学

1.3 生化特性

1.4 临床症状

1.5 病理变化

1.6 致病机理

1.6.1 脂多糖

1.6.2 肠毒素

1.6.3 侵袭蛋白

1.6.4 毒力岛和Ⅲ型分泌系统

2 鸡沙门氏菌病实验室诊断技术

2.1 传统的病原学检测

2.2.1 PCR

2.2.2 实时荧光定量PCR

2.2.3 核酸探针技术

2.3 免疫学诊断方法

2.3.1 免疫荧光技术

2.3.2 ELISA方法

2.2.3 免疫胶体金技术

第二章 试验部分

试验一 鸡沙门氏菌病原的分离鉴定及耐药性分析

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.2 主要仪器与试剂

1.2 方法

1.2.1 引物设计与合成

1.2.2 平板凝集试验

1.2.3 细菌的分离与培养

1.2.4 沙门氏菌生化鉴定

1.2.5 眼观病变

1.2.6 血清学试验

1.2.7 常规PCR检测

1.2.8 药敏试验

2 结果

2.1 平板凝集试验结果

2.2 分离株的培养特性

2.3 生化鉴定和血清型试验

2.4 大体剖检变化

2.5 分离菌PCR鉴定结果及序列分析

2.6 药敏试验结果

3 讨论

试验二 鸡沙门氏菌套式PCR方法的建立及初步临床应用

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株及临床病料

1.1.2 试剂及仪器

1.2 方法

1.2.1 引物设计与合成

1.2.2 重组质粒制备

1.2.3 最佳引物体积用量的确立

2 结果

2.1 目的基因PCR扩增及测序结果

2.2 重组质粒标准品的鉴定

2.3 套式PCR方法的建立

2.3.1 最佳引物体积的确立

2.3.5 临床样品的检测结果

3 讨论

试验三 环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测鸡沙门菌方法的建立

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.2.3 LAMP-LFD检测方法的建立及反应条件优化

1.2.4 LFD检测LAMP反应产物

1.2.5 LAMP-LFD的特异性和重复性实验

1.2.6 LAMP-LFD的灵敏度实验

1.2.7 沙门菌病原人工污染的鸡蛋及临床样品检测

2.1 沙门氏菌LAMP-LFD检测方法的建立

2.2 LAMP扩增最佳反应条件的确定

2.3 LAMP-LFD检测方法的特异性和重复性试验

2.4 LAMP-LFD灵敏度分析

2.5 LAMP-LFD检测鸡沙门氏菌人工污染的鸡蛋及临床样品

3 讨论

试验四 鸡沙门氏菌免疫胶体金试纸条的建立及初步应用

1.1 材料

1.2 方法

1.2.2 融合蛋白的Western blotting分析

1.2.4 玻璃容器的清洁

1.2.5 胶体金溶液的制备

1.2.11 胶体金试纸条检测方法性能的验证

2 结果

2.1 鸡沙门氏菌invA基因的PCR扩增、克隆及鉴定

2.2 InvA基因原核表达载体pET-30a-invA的PCR和酶切鉴定

2.3 InvA重组蛋白的表达和纯化

2.4 InvA重组蛋白的Western blotting分析

2.5 ELISA检测InvA重组蛋白的活性结果

2.6 胶体金溶液制备及鉴定

2.7 最佳标记pH值及抗体浓度的确定

2.8 免疫胶体金试纸条的组装及检测结果判定

2.9 免疫胶体金试纸条检测方法性能的验证结果

2.9.1 试纸条特异性检测结果

2.9.2 试纸条灵敏性检测结果

2.9.3 试纸条的稳定性和重复性检测结果

2.9.4 试纸条的初步临床样品检测结果

3 讨论

全文结论

论文的创新点

参考文献

致谢

作者简介