人乳腺癌细胞cDNA表达文库构建及特异性抗原基因筛选

摘要

该研究针对我院前期制备的一株乳腺癌单克隆抗体(M4G3),利用cDNA文库的构建和筛选技术,完成了此乳腺癌特异抗原基因的克隆与表达,为此抗体的临床应用及进一步阐明乳腺癌发生、发展机制提供了可靠的依据.结论:1.与M4G3单抗结合的乳腺癌抗原分子量约为48,000 dalton.此抗原是与ER、PR、BP1、P185都不相同的另外一种蛋白分子.2.构建的T47D细胞cDNA文库完整,具有良好的质量,为进一步的抗体筛选奠定了基础.同时由于该文库包含了此乳腺癌细胞的全部基因信息,因此也可以用其他的抗体或寡核苷酸探针筛选乳腺癌的相关基因.3.通过抗体筛选得到一阳性克隆,分子大小约为3.3kb,序列分析和特性分析正在进行中.

目录

前言

第一部分M4G3相关抗原高表达细胞株的筛选

材料与方法

一、技术路线

二、细胞株简介

三、细胞培养及单抗制备

四、四种细胞的免疫细胞化学鉴定

五、四种细胞的Western Blot鉴定

结果

讨论

第二部分乳腺癌T47D cDNA文库构建及鉴定

材料与方法

一、技术路线

二、主要实验材料、试剂及仪器

三、T47D总RNA的制备

四、T47D mRNA的分离

五、cDNA文库构建准备工作：

六、cDNA合成及文库构建

七、cDNA文库鉴定

九、cDNA文库扩增及滴定

结果

讨论

第三部分T47D cDNA文库的筛选

材料与方法

一、技术路线

二、主要实验材料、试剂及仪器

三、实验方法、步骤

结果

讨论

总结与展望

参考文献

致谢

综述一：cDNA文库构建方法的进展

综述二：胚胎干细胞的分离与培养