采用SEREX方法从cDNA表达文库中筛选大肠癌抗原基因

摘要

目的:寻找人源性大肠癌特异性抗原基因。rn 方法:采用SMART技术构建人大肠癌组织来源的cDNA噬菌体表达文库，以自体或异体大肠癌患者血清按SEREX方法进行免疫筛选，对平板法扩增获得的阳性克隆片段导入克隆载体pUC T后进行测序、鉴定和BLAST同源性比较，并根据cDNA序列进行生物信息分析。rn 结果:构建了3个大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库，其滴度分别为2.39×106 pfu/mL，2.07×106 pfu/mL和1.86×106pfu/mL，插入片段长度为0.5~4 kb，平均分别为1.4、1.61和1.3 kb，重组率最高达到97.5％。选择高滴度文库扩增后滴度达到4.1×1010 pfu/mL。SEREX筛选共获得16个阳性克隆，代表12个不同抗原基因，其中10个基因片段为已知抗原基因，如IFITM1、CD24、Survivin、KLK6等，2个为未知EST片段。根据序列分析，筛选出的抗原基因有结构基因、调节基因、代谢相关基因等。rn 结论:利用SEREX方法筛选出大肠肿瘤相关抗原基因并获得2个肿瘤抗原候选基因。