采用SEREX方法从cDNA表达文库中筛选大肠癌抗原基因

摘要

目的 寻找人源性大肠癌特异性抗原基因.方法 采用SMART技术构建人大肠癌组织来源的eDNA噬菌体表达文库,以自体或异体大肠癌患者血清按SEREX方法进行免疫筛选,对平板法扩增获得的阳性克隆片段导人克隆载体PUCm-T后进行测序、鉴定和BLAST同源性比较,并根据cDNA序列进行生物信息分析.结果 构建了3个大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库,其滴度分别为2.39×106 pfu/mL、2.07 × 106 pfu/mL和1.86×106 pfu/mL,插入片段长度为0.5～4 kb,平均分别为1.4、1.6和1.3 kb,重组率最高达到97.5%.选择高滴度文库扩增后滴度达到4.1×1010 pfu/mL.SEREX筛选共获得16个阳性克隆,代表12个不同抗原基因,其中10个基因片段为已知抗原基因,如IFITM1、CD24、Survivin、KLK6等,2个为未知EST片段.根据序列分析,筛选出的抗原基因有结构基因、调节基因、代谢相关基因等.结论 利用SEREX方法筛选出大肠肿瘤相关抗原基因并获得2个肿瘤抗原候选基因.