沙眼衣原体J型野生株ompA基因重组子的构建

摘要

DNA疫苗是运用基因工程技术,将编码某种蛋白的外源基因与细菌质粒构建的重组体直接免疫机体,转染宿主细胞,使其表达保护性抗原,从而诱导机体产生特异性免疫的疫苗.该实验的目的是构建C.t主要外膜蛋白(MOMP)编码基因ompA与pcDNA3质粒的重组体ompA-pcDNA3,即C.t的DNA疫苗,希望能为C.t DNA疫苗的动物实验研究提供材料.实验中选用的真核表达载体为pcDNA3质粒,目的基因为C.t的MOMP编码基因ompA,使用的C.t标本来源于性传播疾病门诊患者的尿道及宫颈分泌物.标本经裂解处理后做为PCR扩增的模板,先用C.t种特异性引物扩增ompA基因,以此来筛选C.t阳性的临床标本;PCR产物经基因测序,确定C.t临床标本的血清型;然后用带限制性酶切位点的血清型特异性引物,PCR扩增此特定血清型的ompA基因;扩增的目的基因与载体经酶切后,连接重组,转化大肠杆菌;最后重组子经抗生素平板筛选、PCR扩增筛选、酶切鉴定后,阳性重组子送测序公司,进行重组子的DNA序列测定.实验显示:PCR扩增方法筛选C.t阳性的临床标本,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,扩增产物大小约1.2Kb,基因测序确定是C.t J血清型;PCR扩增J型C.t MOMP编码基因ompA,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,扩增产物片段约1.0Kb,与预期的1022bp一致;PCR扩增方法筛选重组子ompA-pcDNA3,琼脂糖凝胶电泳提示ompA基因存在于pcDNA3质粒中;双酶切法筛选重组子,酶切产生了5.4Kb和1.0Kb两个片段,进一步证明ompA基因存在于pcDNA3质粒中;阳性重组子进行基因测序,证明插入pcDNA3载体中的基因片段与genebank中J型C.t的ompA基因序列一致.上述结果证明该实验成功构建了C.t J型野生株ompA基因的重组子ompA-pcDNA3.

目录

英文缩略词表

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

沙眼衣原体疫苗研究的新进展

参考文献

致谢