表达可溶性TGF-βRⅡ胞外区和RANTES基因的腺病毒载体构建以及联合用于肿瘤治疗的实验研究

摘要

目的:探讨表达可溶性T β RⅡ胞外区和RANTES基因的腺病毒载体的构建及其在肿瘤生物治疗学方面的作用机制和效果.方法:RT-PCR法克隆人和鼠源性RANTES基因和T β RⅡ胞外区编码序列,采用AD-easy XL Adenovirus Vector System试剂盒分别构建表达上述基因的腺病毒载体.通过趋化试验和ELISA试验分别验证表达可溶性T β RⅡ胞外区序列和RANTES基因的腺病毒载体转染细胞后所具有的趋化免疫细胞和阻断TGF-β信号通路的作用.将两者共同应用于体外杀伤试验和荷瘤小鼠体内试验,通过观察免疫效应细胞对肿瘤细胞的杀伤能力和对小鼠体内肿瘤的抑制作用来评价其在肿瘤治疗方面的作用.结果:该研究克隆了人和鼠源性RANTES基因和T β RⅡ胞外区编码序列并成功地构建了表达这些基因的腺病毒载体.功能试验表明由腺病毒表达的RANTES和T β RⅡ胞外区具有趋化免疫细胞和阻断TGF-β信号通路的作用.体外杀伤试验表明两者共同转染可增强免疫细胞的杀伤能力,而体内试验则表明两者共同应用于荷瘤小鼠可抑制肿瘤的发展,延长荷瘤小鼠的生存时间.结论:AD-easy XL Adenovirus Vector System试剂盒具有高效、简便、省时的优点.联合应用表达可溶性T β RⅡ胞外区和RANTES基因的腺病毒载体进行肿瘤的生物学治疗可显著地提高免疫细胞的杀伤能力并延长荷瘤小鼠的生存时间,为肿瘤的生物学治疗又提供了新的研究方向.

目录

前言

技术路线图

第一部分表达可溶性Tβ RⅡ胞外区和RANTES基因的腺病毒载体的构建

材料和方法

结果

讨论

第二部分Ad-RANTES和Ad-TβRⅡ胞外区的功能试验和其对肿瘤的作用

材料和方法

结果

讨论

参考文献

综述

致谢