外周血单核细胞来源的树突状细胞体外培养及抗原负载策略性研究

摘要

第一部分树突状细胞体外培养条件的优化目的:探讨改善外周血来源的树突状细胞(DC)体外培养的方法,以促进DC的成熟并提高其递呈抗原和激发特异性免疫反应的能力.方法:用贴壁的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)在含有粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulatingfactor,GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)的含10％FBS的RPMI1640培养基体外培养至第5天.再分为三种条件(1)TNF-α+CD40L(2)TNF-α+CD40L+HSP70(3)TNF-α+CD40L+HSP70和GM-CSF连接物促进其成熟,用流式细胞仪鉴定表型,并进行功能检测,以比较几种因子在DC体外培养的作用.结论:HSP、HSP和GM-CSF连接物是体外培养DC的重要因子,可促进DC的成熟,成熟标志物CD83明显高于TNF-α+CD40L组.HSP-70以及HSP-70与GM-CSF的交联物可提高DC诱导T细胞活化的能力,.第二部分凋亡细胞及细胞裂解物作为负载抗原制备肿瘤疫苗的研究目的:比较凋亡的肿瘤细胞及肿瘤细胞裂解物作为抗原,经DC细胞递呈,体外诱导自体T细胞产生的CTL对相应靶细胞的特异性杀伤作用,以寻找更为有效的抗原制备方法.方法:<'137>Cs照射和MMC处理后凋亡的肿瘤细胞及肿瘤细胞裂解物作为抗原,经自体DC递呈后刺激相对应的T细胞产生CTL,LDH(乳酸脱氢酶)法对相应抗原的靶细胞进行杀伤试验,胞内染色法检测T细胞活化情况.结论:<'137>Cs照射和MMC处理后凋亡的肿瘤细胞及肿瘤细胞裂解物均可作为抗原制备DC肿瘤疫苗诱导特异性杀伤作用,而以凋亡细胞为佳.

目录

第一部分 DC培养方案的优化

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分凋亡细胞及细胞裂解物疫苗的研究

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

致谢

参考文献

综述一 DC及疫苗的进展

综述二 热休克蛋白及研究进展

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