人输卵管上皮细胞共培养和表皮生长因子对小鼠受精卵体外发育影响

摘要

虽然人体外受精-胚胎移植(IVF-ET)已经取得了巨大的发展，但仍有许多问题尚待解决。其中IVF-ET临床妊娠率仍较低，其主要原因可能是体外培养缺乏自然受孕的内环境及胚胎发育所需要的营养因子，使其不能满足胚胎进一步发育的需要，导致大约50％的胚胎在2-4细胞阶段发生阻滞现象。为模拟体内的自然环境，本研究建立了人输卵管上皮细胞共培养体系及在体外培养过程中加入表皮生长因子(EGF)，以探讨人输卵管上皮细胞培养体系及EGF对受精卵体外发育的影响。 目的：通过人输卵管上皮细胞共培养体系及EGF作用，探讨输卵管上皮及EGF对受精卵体外发育的影响。 方法：建立人输卵管上皮细胞共培养体系，将小鼠雌雄原核(2PN)受精卵随机分为3组，即对照组、实验组Ⅰ和实验组Ⅱ。 对照组：小鼠受精卵放入DMEM+BSA+青链霉素培养液中培养 实验组Ⅰ：将小鼠受精卵放入人输卵管上皮原代或一代细胞+DMEM+BSA+青链霉素培养液中培养 实验组Ⅱ：将小鼠受精卵放入EGF+DMEM+BSA+青链霉素培养液中培养 结果：1、小鼠受精卵在DMEM培养液即对照组中单独培养，发育至2细胞、4细胞、8细胞及囊胚期的比率分别为：89.3％、48.7％、34.7％和29.3％。 2、小鼠受精卵与人输卵管上皮细胞即实验组Ⅰ共培养，发育至2细胞、4细胞、8细胞及囊胚期的比率分别为：86.3％、80.6％、75.4％和66.3％。实验组Ⅰ与对照组相比，发育至2细胞的胚胎数无差异，P＞0.05。发育至4细胞、8细胞和囊胚期的胚胎数有差异，P＜0.05。 3、小鼠受精卵加入EGF即实验组Ⅱ，发育至2细胞、4细胞、8细胞及囊胚期的比率分别为：82.6％、76.0％、69.6％和62.5％。实验组Ⅱ与对照组相比，发育至2细胞的胚胎数无差异，P＞0.05。发育至4细胞、8细胞和囊胚期的胚胎数有差异，P＜0.05。 结论：1.人输卵管上皮细胞共培养体系和EGF对小鼠早期胚胎克服体外发育中的阻断有帮助。 2.人输卵管上皮细胞共培养体系可以提高小鼠受精卵发育至多细胞及囊胚期的胚胎数目。 3.EGF可以提高小鼠受精卵发育至多细胞及囊胚期的胚胎数目。

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