五肽化合物CMS010.26对移植排斥和类风湿关节炎的治疗作用及机理研究

摘要

目的：研究五肽化合物CMS010.26对同种移植排斥和类风湿关节炎的治疗作用，并初步探讨其通过p56lck和PI3K信号转导途径，抑制T淋巴细胞活化的作用机制。 方法：1.MTT法观察CMS010.26体外对单向MLR的影响；建立小鼠同种尾—背皮肤移植和耳后心肌移植模型，计算移植物平均生存时间，HE染色观察CMS010.26对移植物的移植排斥病理损害的影响；免疫组化方法观察CMS010.26对移植物的T淋巴细胞浸润的影响。 2.建立大鼠AA模型，测量各组大鼠的踝关节周长，观察CMS010.26对AA大鼠踝关节肿胀的治疗作用，HE染色观察CMS010.26对AA大鼠踝关节病理改变的抑制作用；MTT法观察CMS010.26对AA大鼠T淋巴细胞增殖的抑制作用；免疫组化方法观察CMS010.26对AA大鼠关节T淋巴细胞浸润的影响。 3.MTT法观察CMS010.26体外对JurkatT细胞增殖的影响；应用免疫沉淀技术和ELISA试剂盒，检测CMS010.26对JurkatT细胞信号转导蛋白p56lck蛋白活性的影响；应用WesternBlot方法，观察CMS010.26对JurkatT细胞p56lck蛋白表达的影响；应用免疫沉淀技术和ELISA方法，检测CMS010.26对JurkatT细胞PI3K蛋白活性的影响；应用荧光实时定量PCR和WesternBlot方法，观察CMS010.26对JurkatT细胞PI3K的调节亚基P85α和催化亚基P110αmRNA水平、P85和P85α蛋白表达的影响。 4.应用免疫沉淀技术和ELISA试剂盒，检测CMS010.26对AA大鼠脾细胞p56lck蛋白活性的影响；应用WesternBlot方法，观察CMS010.26对AA大鼠脾细胞p56lck蛋白表达的影响；应用免疫沉淀技术和ELISA方法，检测CMS010.26对AA大鼠脾细胞PI3K蛋白活性的影响；应用荧光实时定量PCR和WesternBlot方法，观察CMS010.26对AA大鼠脾细胞PI3K的P85α和P110αmRNA水平、P85和P85α蛋白表达的影响。 结果：1.CMS010.26(1-100μg/ml)可以抑制单向MLR中T淋巴细胞的增殖，与对照组比较，有显著性差异(P＜0.05)。CMS010.26给药剂量为200μg/kg/d和100μg/kg/d，可以延长小鼠同种皮肤和心肌移植物的平均生存时间，与生理盐水组比较，有显著性差异(P＜0.01)，移植物平均生存时间延长率分别为41.4％、40.5％(皮肤)和34.4％、39.6％(心肌)。CMS010.26能够减轻移植物的病理损害，减轻移植物中CD3+T淋巴细胞的浸润。 2.CMS010.26给药剂量为200μg/kg/d和100μg/kg/d，腹腔注射给药20天，可以减轻AA大鼠致炎侧及对侧踝关节肿胀，与生理盐水组比较，有显著性差异(P＜0.05)。CMS010.26能抑制AA大鼠T淋巴细胞转化功能，与生理盐水组比较，有显著性差异(P＜0.05)。CMS010.26能够降低关节的病理损害，减少关节部位的CD3+T淋巴细胞浸润，降低T淋巴细胞活化程度。 3.CMS010.26在0.1-100μg/ml浓度范围内，可以抑制CD3McAb诱导的JurkatT细胞增殖，与对照组比较，有显著性差异(P＜0.05)。最佳作用浓度为10μg/ml和1μg/ml，抑制率分别为28.81％和35.48％。CMS010.26浓度为10μg/ml和1μg/ml，可以抑制JurkatT细胞p56lck活性，抑制p56lck蛋白表达，与对照组比较，有显著性差异(P＜0.05)。CMS010.26可以抑制JurkatT细胞PI3K活性，与对照组比较，有显著性差异(P＜0.05)。CMS010.26可以抑制P110α和P85αmRNA水平，以及P85和P85α蛋白表达，与对照组比较，有显著性差异(P＜0.05)。 4.CMS010.26给药剂量为200μg/kg/d和100μg/kg/d时，腹腔注射给药20天，可以抑制AA大鼠脾细胞p56lck活性，抑制p56lck蛋白表达，与对照组比较，有显著性差异(P＜0.05)。CMS010.26可以抑制AA大鼠脾细胞PI3K活性，与生理盐水组比较，有显著性差异(P＜0.05)。CMS010.26可以抑制AA大鼠脾细胞P¨0α和P85αmRNA水平，以及P85和P85α蛋白表达，与生理盐水组比较，有显著性差异(P＜0.05)。 结论：CMS010.26可以延长同种移植物生存时间，降低移植物的病理损伤和T淋巴细胞浸润；CMS010.26可以减轻AA大鼠的关节肿胀，改善AA病理损伤，减少T淋巴细胞的浸润。其作用机制可能是通过抑制T细胞p56lck和PI3K信号转导通路，阻止T细胞的异常活化，达到治疗移植排斥和RA的效应。

目录

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英文缩略词

前言

第一部分CMS010.26对同种移植排斥反应治疗作用的实验研究

第二部分CMS010.26对大鼠AA治疗作用的实验研究

第三部分CMS010.26对Jurkat T细胞PTK和PI3K信号转导途径影响的实验研究

第四部分CMS010.26对AA大鼠脾细胞信号转导途径影响的实验研究

讨论

结论

参考文献

致谢