肠杆菌科细菌质粒介导β-内酰胺类抗生素耐药性研究

摘要

[目的] 研究肠杆菌科细菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)及质粒介导AmpC酶菌株的分布。 [方法] 收集天津胸科医院2004年临床分离肠杆菌科细菌396株，以K-B法测定细菌对抗生素的敏感性；以NCCLS推荐纸片确证试验检测其产ESBLs情况，以头孢西丁试验粗筛产AmpC酶菌。以细菌接合试验辅助耐药基因的定位。提取质粒DNA作模板，采用聚合酶链反应(PCR)和多重PCR方法及序列分析确定ESBLs及质粒介导AmpC酶的基因型 [结果] 396株肠杆菌科细菌对氨苄西林耐药率高达91.4％，一、二代头孢菌素耐药率高于40％，三代头孢菌素中头孢噻肟耐药率达25.70％，庆大霉素耐药率达26.5％，环丙沙星耐药率达23.2％，复方磺胺耐药率达31.8％，三耐以上的多重耐药菌株达71.2％。其中产ESBLs菌株检出率为25.0％(99/396)，疑似产AmpC酶菌株检出率为16.9％(67/396)；产ESBLs菌株除对亚胺陪南仍保持较好的敏感性(99.0％)以外，对其他抗生素耐药率均高于40％，青霉素类和一、二代头孢菌素耐药率均为100％，三代头孢菌素中头孢噻肟耐药性最高，达79.6％。产ESBLs菌株接合试验阳性率为40.4％(40/99)，疑似产AmpC酶菌株接合试验阳性率为10.4％(7/67)，接合子药敏试验证实供体菌的耐药标誌部分或全部传递给受体菌；以40株接合试验阳性的产ESBLs菌株的质粒DNA为模板用PCR方法进行基因分型，结果显示TEM、SHV、CTX-M阳性率分别为50.0％、20.0％和67.5％，产2种型别ESBLs的菌株达61.3％；对7株接合试验阳性疑似产AmpC酶菌株提取其质粒DNA为模板，用PCR方法进行基因分型，，结果有4株为DHA型阳性，其中2株菌同时产ESBLs，高度疑似为产超超广谱β-内酰胺酶(SSBL)菌株。随机抽取5株ESBLs扩增阳性的PCR产物进行序列分析，其结果证实2株TEM型扩增产物均属TEM-1型，经NCBI基因库查询和BLASTn比对，与奇异变形杆菌(AY729027)注册的相应序列的核苷酸相似性分别为99.76％(835/837)、99.62％(847/851)，氨基酸相似性分别为100％、99.62％(259/260)；1株SHV型扩增产物属于SHV-12型，与弗劳地枸橼酸杆菌(AY826418)注册的相应序列的核苷酸及氨基酸相似性均为100％；2株CTX-M型扩增产物分属CTX-M3、CTX-M14型，分别与弗劳地枸橼酸杆菌(Y10278)、液化沙雷氏菌((AF462398)注册的相应序列的核苷酸相似性为99.82％(534/536)、99.63(534/536)，氨基酸相似性为100％、99.45％(180/181)。 [结论] 肠杆菌科细菌抗生素耐药性较严重，且呈多重耐药模式；产ESBLs菌及疑似产AmpC酶菌占有重要地位，其耐药性可通过接合传递；ESBLs基因分型以CTX-M型为主，其次为TEM型和SHV型，同时产2种以上酶菌株居多数，并发现可疑产超超广谱酶(SSBL)菌株；其中CTX-M14、SHV-12型ESBLs为天津地区首次报道。本研究为临床感染药物的选择和医院感染的控制提供了依据。

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