低碘膳食对大鼠脑组织中同源盒基因Nkxs表达及细胞凋亡的影响

摘要

本研究分为三部分： 第一部分：低碘膳食对大鼠脑组织中同源盒基因Nkxs表达的影响 为探讨甲状腺功能低下对大鼠脑组织中同源盒基因Nkxs表达的影响，本文复制了胚胎期和生后发育临界期碘缺乏致甲低的大鼠模型，取孕16天、新生及20日龄仔鼠为实验动物，(分别相当于人胚胎发育的早、中、晚期)利用荧光实时定量PCR技术检测正常及低碘仔鼠脑组织中Nkxs表达水平。发现随着年龄增长，Nkx-2.1表达水平迅速下降，各年龄段表达水平差别有统计学意义；各年龄组低碘及正常大鼠表达水平差别有统计学意义，孕16天正常大鼠Nkx-2.1表达水平明显高于低碘大鼠，而新生及20日龄低碘大鼠却明显高于正常大鼠。正常大鼠,Nkx-2.2在新生期表达水平最低；低碘大鼠随年龄增长表达水平迅速增高，各年龄组表达水平差别有统计学意义。Nkx-6.1在孕16天表达水平最高，低碘及正常大鼠表达水平差别有统计学意义，新生期、20日龄低碘及正常大鼠表达水平差别有统计学意义；各年龄段正常大鼠表达水平差别有统计学意义；低碘大鼠在孕16天与新生、20日龄表达水平差别有统计学意义，而新生与20日龄之间表达差别无统计学意义。Nkx-6.2在孕16天及新生期表达水平都很低，20日龄表达水平明显高于前两组育期；孕16天、20日龄低碘与正常大鼠表达水平差别有统计学意义，新生期低碘与正常大鼠表达水平差别无统计学意义。 结果表明：甲状腺激素与同源盒基因Nkx之间确实存在相关关系，其相关性在孕16天胎鼠中就已表现出来，而此时胎鼠的甲状腺组织尚未发育成熟，提示母鼠甲状腺激素对胎鼠发育的重要作用。 第二部分：甲状腺激素对原代培养大鼠神经胶质细胞Nkxs表达水平的影响 为了解THs对大鼠神经胶质细胞Nkxs基因表达的刺激作用，本文利用正常Wistar大鼠脑组织的原代神经胶质细胞为研究对象，加入一定剂量的THs(T<,3>和T<,4>)，在给药后0、12、24、48和72小时分别收获细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测细胞中Nkxs各亚型mRNA水平，动态观察THs对Nkxs表达水平的影响。 结果发现在0h、12h、24h10<'-8>M T<,3>对神经胶质细胞Nkx-2.1表达量无明显刺激作用，48h在T<,3>刺激作用下Nkx-2.1表达量明显低于对照组，72h其表达量反馈性增高，明显高于对照组；在T<,4>刺激作用下，Nkx-2.1表达量在12h、24h、48h都明显低于对照组，72h其表达量也反馈l生增高。Nkx-2.2在T3刺激12h后，其表达量明显低于对照组，24h后，其表达量明显高于对照组，48h后其表达量逐渐下降，72h后，其表达量又反馈性增高，与对照组比较差别有统计学意义；T<,4>对于神经胶质细胞中Nkx-2.2表达的刺激作用在0h、12h、24h、72h与T<,3>刺激作用相似，在48h对Nkx-2.2表达的下调作用比T<,3>作用更明显。Nkx-6.1在12h、24h对于在T<,3>、T<,4>刺激作用下都有明显的下调作用，其表达量都明显低于对照组，48时在T<,3>、T<,4>刺激作用下，其表达量都反馈性增高，都明显高于对照组，T<,3>的上调作用要高于T<,4>作用，而72h T<,4>刺激作用明显增高，其表达量明显高于对照组及T<,3>作用组。Nkx-6.2在T<,3>、T<,4>刺激作用12h后其表达量高于对照组，24h、48h后其表达量逐渐下调，T<,3>、T<,4>刺激作用72h后，其表达量都明显高于对照组。结果表明：THs对于大鼠神经胶质细胞中Nkxs各亚型都有不同程度的刺激作用，但这种作用趋势不是很明显，可能与低激素血清作用时间过短以及细胞收获时间点的选择有关。此外T<,4>不仅仅是一种激素原，其刺激作用有时也明显高于T<,3>刺激作用。 第三部分：低碘膳食对大鼠脑组织细胞凋亡的影响 为了解正常和碘缺乏大鼠脑组织细胞凋亡是否存在差异，本文利用已经复制好的低碘及正常大鼠脑组织制作冰冻切片，采用原位细胞凋亡检测试剂盒(Tunnel试剂盒)检测新生期低碘及正常大鼠脑组织细胞凋亡情况。 结果发现，新生期低碘与正常大鼠脑组织细胞凋亡差别有统计学意义，推测低碘导致的脑发育迟滞与其引起的细胞凋亡增加有关，最终导致脑组织不可逆性损伤。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一部分低碘膳食对大鼠脑组织中同源盒基因Nkxs表达的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

第二部分甲状腺激素对原代培养大鼠神经胶质细胞Nkxs表达的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

第三部分低碘及正常大鼠胚胎脑神经细胞及髓鞘细胞的凋亡、分化的研究

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

致谢

附图