软组织透明细胞肉瘤融合基因及组织发生研究

摘要

目的：探讨透明细胞肉瘤石蜡包埋组织中检测EWS-ATF1融合基因的可行性及EWS-ATF1融合基因表达在透明细胞肉瘤诊断中的意义。通过TA克隆测序分析融合基因EWS-ATF1不同的融合位点与临床预后之间的关系。并且，通过逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学染色检测小眼畸形相关转录因子(MITF)mRNA及MITF蛋白的表达来探讨透明细胞肉瘤的组织发生与起源。 方法：收集确诊为透明细胞肉瘤的26例福尔马林固定石蜡包埋组织标本，5例组织库保存的冰冻新鲜组织标本，另外收集非透明细胞肉瘤标本20例，均为石蜡包埋标本，包括尤文氏肉瘤6例，原始神经外胚层瘤5例，腺泡状软组织肉瘤2例，恶性黑色素瘤2例，滑膜肉瘤5例。所有标本均有HE染色切片，全部经2名以上病理专家复读确诊：过氧化物酶染色(SP)方法对26例透明细胞肉瘤石蜡组织标本进行免疫组化染色，检测S-100、HMB-45蛋白的表达。选取其中24例石蜡组织标本用SP方法检测MITF蛋白的表达。5例冰冻组织标本进行透射电镜切片制作；从石蜡包埋组织及冰冻新鲜组织标本中提取RNA，β-肌动蛋白、β2-微球蛋白及GAPDH作为内参照，用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和巢式PCR检测EWS-ATF1融合基因的表达；RT-PCR方法检测5例冰冻组织标本MITF基因mRNA的表达：对PCR产物进行TA克隆测序；透射电镜：5例冰冻透明细胞肉瘤标本经戊二醛固定，锇酸后固定，脱水，环氧树脂包埋，高温聚合，作超薄切片，电镜下观察透明细胞肉瘤的超微结构。 结果：26例福尔马林固定石蜡包埋组织标本检测到22例β-肌动蛋白阳性，24例β2微球蛋白阳性，其中20例EWS-ATF1融合基因阳性，16例为EWS-ATF1I型，4例为EWS-ATF1III型，余4例EWS-ATF1融合基因阴性。对照组均未检测到EWS-ATF1融合基因的表达。26例透明细胞肉瘤石蜡组织标本中S-100及HMB-45的总阳性率分别为79.2％、70.8％；4例透明细胞肉瘤冰冻组织标本可检测到GAPDHmRNA表达，余1例阴性；100％(4/4)检测到MITFmRNA表达。所选取的24例CCS石蜡组织标本中MITF总阳性率为83.3％(20/24)；电镜结果：大部分病例存在不同发育阶段的黑色素小体，并可见数量不等的胞质内糖原、肿胀的线粒体和基底膜。 结论：在透明细胞肉瘤石蜡包埋组织中运用RT-PCR检测EWS—ATF1融合基因是可行的：融合基因EWS—ATF1的表达可作为除免疫组化外的—辅助诊断和鉴别诊断有力工具；透明细胞肉瘤中MITF在基因和蛋白水平的高表达，表明其在很大程度上向黑色素细胞分化。由此可推测透明细胞肉瘤最大可能起源于神经嵴、发生于肌腱、腱膜的一种特殊类型的恶性肿瘤。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:符号说明

声明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、软组织透明细胞肉瘤石蜡包埋组织中EWS-ATF1融合基因的表达及诊断意义

1.1对象和方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

二、软组织透明细胞肉瘤组织起源的探讨

2.1对象与方法

2.2结果

2.3讨论

2.4小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述软组织透明细胞肉瘤的研究进展

致谢