五肽化合物PLNPK对抗Thy1系膜增生性肾小球肾炎的治疗作用及机制探讨

摘要

目的： 研究五肽化合物PLNPK对大鼠抗Thy1MsPGN的治疗作用，并初步探讨其通过p38信号转导途径抑制巨噬细胞活化以及巨噬细胞表达IL-1β的作用机制。 方法： 1.建立大鼠抗Th1MsPGN模型；通过测定抗Thy1MsPGN大鼠24hrs尿蛋白、血中总蛋白、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、尿素氮和肌酐，观察PLNPK对MsPGN肾脏功能的影响；免疫荧光法观察PLNPK对Thy1MsPGN大鼠肾脏免疫复合物沉积的影响；HE染色和Masson染色观察PLNPK对大鼠Thy1MsPGN肾脏病理损害的影响；透射电镜观察PLNPK对抗Thy1MsPGN大鼠肾脏微观病理结构的影响。 2.应用免疫组化方法，采用抗CD68单克隆抗体检测PLNPK对抗Thy1MsPGN大鼠肾脏巨噬细胞浸润的影响；采用抗CD86单克隆抗体检测PLNPK体外对大鼠腹腔巨噬细胞活化的影响。 3.应用ELISA技术，检测PLNPK体外对大鼠腹腔巨噬细胞活化后表达IL-1β的影响；应用荧光实时定量PCR技术，检测PLNPK体外对大鼠腹腔巨噬细胞活化后IL-1βmRNA表达的影响；应用Westernblot技术，检测PLNPK体外对大鼠腹腔巨噬细胞p38激酶磷酸化的影响。 结果： 1.PLNPK剂量为100μg/kg/d和200μg/kg/d，给药7天后至实验结束，给药组大鼠尿蛋白水平明显降低，与生理盐水组比较有统计学意义(P<0.05)；给药28天后至实验结束，给药组大鼠血中总蛋白和白蛋白水平升高，与生理盐水组比较有统计学意义(P<0.05)；总胆固醇、甘油三酯、尿素氮和肌酐浓度变化不明显，与生理盐水组比较无统计学意义(P>0.05)。PLNPK能减轻大鼠肾脏病理损伤，可以减少大鼠肾脏原位免疫复合物的形成；降低肾脏系膜细胞增生和细胞外基质堆积程度，减少炎性细胞浸润；减少系膜区电子致密物沉积，减轻肾小球上皮细胞、足细胞和基底膜的损伤。 2.PLNPK给药剂量为100μg/kg/d和200μg/kg/d，可以减少抗Thy1MsPGN大鼠肾脏巨噬细胞浸润；PLNPK浓度为1.6mg/ml、3.2mg/ml和6.4mg/ml，在体外可以明显抑制大鼠腹腔巨噬细胞活化。 3.PLNPK浓度为1.6mg/ml、3.2mg/ml和6.4mg/ml，可以降低大鼠腹腔巨噬细胞活化后表达IL-1β的水平，并抑制巨噬细胞活化后IL-1βmRNA表达水平，与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。PLNPK可以抑制大鼠腹腔巨噬细胞活化后p38激酶磷酸化水平，与LPS对照组比较有统计学意义(P<0.05)。 结论： PLNPK可以改善抗Thy1MsPGN大鼠肾脏功能，降低24hhrs尿蛋白水平，升高血中总蛋白和白蛋白水平；改善大鼠肾脏病理损伤。其作用机制可能是通过抑制巨噬细胞p38激酶磷酸化，抑制巨噬细胞浸润和活化，并减少活化巨噬细胞IL-1β的表达水平，从而达到治疗MsPGN的作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:符号说明

声明

前言

一、PLNPK对大鼠抗Thay1 MsPGN治疗作用的实验研究

实验一PLNPK对大鼠抗Thy1 MsPGN的影响

1实验材料及对象

2实验方法

3实验结果

实验二PLNPK对大鼠抗Thy1 MsPGN肾脏病理损伤的影响

1材料

2方法

3结果

二、PLNPK对巨噬细胞细胞影响的实验研究

实验一PLNPK对MsPGN大鼠肾组织内巨噬细胞浸润的影响

1材料

2CD68免疫组化染色

3结果

实验二PLNPK体外对大鼠腹腔巨噬细胞活化的影响

1材料

2方法

3结果

实验三PLNPK体外对大鼠腹腔巨噬细胞活化后分泌细胞因子IL-1β的影响

1材料

2方法

3结果

实验四PLNPK体外对大鼠腹腔巨噬细胞活化后IL-1βmRNA表达水平的影响

1材料

2方法

3结果

实验五PLNPK体外对大鼠腹腔巨噬细胞活化信号传导蛋白P38磷酸化修饰的影响

1材料

2方法

3结果

讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 肾小球肾炎中巨噬细胞与系膜细胞间的相互作用

致谢