乳腺浸润性微乳头状癌中FEZ1/LZTS1基因的表达及启动子区域甲基化的研究

摘要

[目的]： 研究FEZ1/LZTS1基因在乳腺浸润性微乳头状癌（IMPC）中的表达，分析其与淋巴结转移等相关病理学特征的关系；并从表观遗传学角度探讨FEZ1/LZTS1基因启动子区域甲基化在IMPC浸润转移过程中的作用。 [方法]： 采用免疫组织化学LSAB法检测100例IMPC中Fez1/Lzts1蛋白的表达，选取100例非特殊型浸润性导管癌（IDC-NOS）作为对照，比较Fez1/Lzts1蛋白在不同病理学类型中表达的差异，分析IMPC中Fez1/Lzts1蛋白的表达与淋巴结转移等相关病理学特征的关系；运用重亚硫酸盐处理基因组DNA-PCR扩增-直接测序的方法检测9例冻存的纯型IMPC、9例混合型IMPC、9例正常乳腺组织及45例IDC-NOS肿瘤组织DNA中FEZ1/LZTS1基因启动子区域甲基化状态；同时采用DHPLC联合测序方法对23例乳腺IMPC、30例IDC-NOS和2例正常乳腺组织中FEZ1/LZTS1基因组DNA编码区进行突变检测。 [结果]： 1.IMPC组淋巴结转移率显著高于IDC-NCS组（Z=-5.655，P=0.000）。 2.IMPC组Fez1/Lzts1蛋白表达低于IDC-NOS组（X2=4.500，P=0.034）。 3.IDC-NOS中Fez1/Lzts1蛋白表达与淋巴结转移、淋巴结分级，以及肿瘤大小显著相关（P=0.000，P=0.002，P=0.035）。IMPC中Fez1/Lzts1蛋白表达也与淋巴结转移、淋巴结分级显著相关（P=0.036，P=0.008）。 4.纯型IMPC组与IDC-NOS组FEZ1/LZTS1基因启动子区18个CpG位点的平均甲基化频率（AML）都明显高于正常乳腺组织（P=0.000，P=0.000）。并且纯型IMPC组18个CpG位点的AML高于IDC-NOS组，差异有统计学意义（t=2.692.P=0.011）。另外，纯型IMPC组18个CpG位点中有3个位点（47、87、127）平均甲基化频率高于IDC-NOS组相应位点，差异有统计学意义（P=0.048，P=0.040，P=0.045）。 5.纯型IMPC组与混合型IMPC组无论是每个CpG位点的AML还是18个CpG位点的AML，两者之间均无明显差异。进一步将混合型IMPC按IMPC所占成分分为IMPC成分>50％组，和IMPC成分<50％组。两组间FEZ1/LZTS1基因启动子区平均甲基化频率也无明显差异。 6.转移IDC-NOS和未转移IDC-NOS间，FEZ1/LZTS1基因启动子区甲基化频率差异有统计学意义（t=2.061，P=0.047）。 7.FEZ1/LZTS1基因第1外显子扩增产物DHPLC筛查分析结果为1种峰型，未发现碱基改变。53例乳腺癌样本中有25例（25/53）在第2外显子扩增产物6544bp处有C→T的碱基改变，但此碱基改变位于内含子。此外，在1例肿瘤样本中检测到第3外显子扩增产物3927bp处有C→G的碱基改变，为亮氨酸（Leu）到缬氨酸（Val）的改变；在第3内含子3540bp处有G→A的碱基改变。 [结论]： 1.Fez1/Lzts1蛋白表达的缺失/下降与IMPC的高淋巴结转移特性相关。 2.启动子区域的高度甲基化可能是促进Fez1/Lzts1蛋白表达缺失/下降的主要原因之一。 3.FEZ1/LZTS1基因转录起始点附近的某些CpG位点可能在IMPC中起到关键作用，我们推测这几个位点发生的甲基化使IMPC较IDC-NOS有着更高的淋巴结转移率。 4.FEZ1/LZTS1基因突变并不是引起其表达下调的主要原因。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

第一部分Fez1/Lzts1蛋白在乳腺乳腺浸润性微小乳头状癌中的表达与淋巴结转移的关系

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分乳腺癌组织中FEZL1／LZTS1基因启动子区域甲基化状态

材料与方法

结果

讨论

小结

第三部分乳腺癌组织中FEZ1／LZTS1基因编码区突变检测

材料与方法

结果

讨论

小结

结论

附图

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 几种乳腺癌转移相关基因的研究进展

致谢