HSP90抑制剂干预TA2小鼠乳腺癌生长和转移的实验研究

摘要

目的： 利用TA2小鼠高转移乳腺癌移植瘤模型，观察外源性HSP90抑制剂17-DMAG对其生长和转移的影响，明确HSP90在TA2小鼠乳腺癌生长和转移中的作用。通过检测肿瘤组织中转移相关分子MMP2、MMP7、MMP9、α-微管蛋白、整合素α4、αL、β2等的表达差异，初步探讨17-DMAG抑制TA2小鼠乳腺癌转移的相关机制。 方法： 1.选取40只正常成年雌性TA2小鼠，自小鼠左侧鼠鼷部接种TA2小鼠高转移性乳腺癌细胞悬液(1×105/ml)，0.2ml/只，并随机分为给药组和对照组，20只/组。接种后每日观察小鼠活动状态及成瘤情况，待触及肿物后腹腔给予17-DMAG，1mg/只/次，一周两次，同时测量肿瘤大小，绘制生长曲线。 2.分别在给药后第14天(给药4次后)和第21天(给药6次后)将给药组和对照组各处死10只小鼠，完整剥离小鼠移植瘤组织和肝、脾组织，称重，留取部分新鲜肿瘤组织，TRIzol法提取组织·RNA，紫外分光法进行RNA定量，进行Real-timePCR。剩余组织常规石蜡包埋，HE染色和免疫组化染色。分别从蛋白和mRNA水平检测给药组和对照组肿瘤组织中MMP2、MMP7、MMP9、α-微管蛋白、整合素α4、αL、β2mRNA的表达。 结果： 1.给药组和对照组移植瘤生长情况接种瘤细胞悬液4天后于小鼠鼠蹊部皮下可触及肿块，随着给药次数的增加和移植瘤生长时间的延长，小鼠逐渐出现活动能力和体表温度降低等状态改变，尤其是对照组小鼠。部分小鼠在实验过程中因肿物生长速度较快、转移较重或给药过程中不慎刺破小鼠腹腔脏器而死亡，所以最后(给药21天)收集到的标本为给药组16例，对照组13例。 2.给予17-DMAG后，给药组小鼠移植瘤生长较对照组明显缓慢，尤其是给药前期。给药后第14天给药组小鼠移植瘤的平均体积明显低于对照组，其差异具有统计学意义(P<0.05)，给药后第21天，两组小鼠移植瘤平均体积间的差别没有统计学意义。 3.给药组小鼠肝、脾转移率分别为31.25％，81.25％，对照组小鼠肝、脾转移率均为92.31％，给药组小鼠肝转移率明显低于对照组，其差异具有统计学意义(P<0.01)；而脾脏转移率之间差异没有统计学意义。虽然给药组小鼠脾转移率未降低，但是镜下可见脾脏结构大致轮廓正常，转移面积较对照组明显小，仅在淋巴细胞之间可见散在的单个瘤巨细胞。 4.给药后第14天给药组小鼠移植瘤、肝和脾的重量均低于对照组小鼠，其中瘤重和脾重间的差异具有统计学意义(P<0.05)，而肝重之间的差异没有统计学意义。给药后第21天给药组小鼠移植瘤、肝和脾的重量均低于对照组小鼠，尤其是脾重间的差异明显，差异具有统计学意义(P<0.05)。 5.免疫组化结果显示，给药组肿瘤组织中MMP2、MMP7、MMP9、α-微管蛋白、整合素αL、β2的表达(分别为：0.2133±0.1181，0.0305±0.0273，0.0833±0.0606，0.145±0.055，0.199±0.033，0.272±0.042)均低于对照组(分别为：0.4621±0.2338，0.2193±0.1430，0.2300±0.0510，0.450±0，109，0.307±0.027，0.389±0.099)，差异均具有统计学意义(P<0.05)，而整合素α4的表达(0.13±0.052)稍高于对照组(0.12±0.040)，但差异不具有统计学意义。 6.Real-timePCR的结果显示给药组MMP2、MMP9、整合素αL、β2mRNA的表达(分别为：0.0013±0.0004，1.034±0.784，0.0020±0.0011，0.0094±0.0037)均低于对照组(0.0010±0.0003，2.318±1.294，0.0037±0.0023，0.0183±0.0072)，差异均具有统计学意义(P<0.05)，而MMP7、整合素α4mRNA的表达差异不具有统计学意义。 结论： 1.17-DMAG能够明显抑制TA2小鼠乳腺癌移植瘤早期的生长及远处转移。 2.根据17-DMAG干预实验结果，表明17-DMAG与HSP90结合后可以抑制HSP90的生物学功能，降低TA2小鼠乳腺癌肝脾转移率，推测TA2小鼠乳腺癌的高转移特性可能与其高表达HSP90有关。 3.17-DMAG给药组MMP2、MMP9、MMP7、α-tubulin、整合素αL、β2表达下调，因而推测其机制可能是17-DMAG与HSP90结合后，影响了肿瘤转移过程中相关分子(如MMP2、MMP9、MMP7、α-tubulin、整合素αL、β2)的表达。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:符号说明

声明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

实验技术路线图

一、TA2小鼠高转移乳腺癌移植瘤模型的建立及17-DMAG干预实验

1.1对象和方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

二、17-DMAG抑制TA2小鼠乳腺癌转移相关机制的初步探讨

2.1对象和方法

2.2结果

2.3讨论

2.4小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 HSP90及其抑制剂17-DMAG与肿瘤发生转移的研究进展

致谢