MMP-9 mRNA和occludin mRNA在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织变化的研究

摘要

目的:实验中制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,观察缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA和紧密连接蛋白occludin mRNA表达的动态变化,进一步探讨缺氧缺血后新生大鼠脑水肿发生的机制,为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)开辟新的途径。
　　 方法:
　　 1.HIBD模型制备:将36只新生7日龄Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为假手术对照组及HIBD3 h、6 h、24 h、48 h、72 h组,每组6只,行颈部正中切口,分离结扎左侧颈总动脉后,给予低氧(8％O2,92％N2)处理2 h,制成HIBD模型。假手术组只予分离但不结扎左侧颈总动脉,于手术恢复后24 h处死。同时观察缺氧时动物行为变化。
　　 2.脑大体形态肉眼观察:在处死实验动物时注意观察每只新生大鼠脑组织的大体形态变化。
　　 3.MMP-9 mRNA和occludin mRNA表达的检测:采用Real-time Q-PCR方法测定新生大鼠结扎侧脑组织MMP-9 mRNA和occludin mRNA的表达。
　　 结果:
　　 1.实验动物模型行为表现:术前36只新生大鼠行为能力正常,均能正常进食,假手术对照组未见行为异常表现；HIBD组经历缺氧后出现严重的行为异常。
　　 2.脑大体形态肉眼观:假手术对照组新生大鼠大脑半球左右对称,未见任何病理变化。HIBD各组大鼠结扎侧半球脑组织受损,24h苍白、水肿明显,体积稍大于对侧；48 h脑水肿程度加重,体积明显大于对侧,可见点状软化坏死灶,脑组织表面有点状出血；72 h结扎侧半球可见苍白区和液化坏死灶,其中有一只新生大鼠结扎侧脑组织完全液化,失去原有形状,并与硬脑膜粘连。
　　 3.MMP-9 mRNA和occludin mRNA在脑组织中的表达水平:
　　 ①对照组大鼠MMP-9 mRNA表达水平极低(0.7933±0.0859),在HIBD3h其表达开始增高(1.1533±0.1291),24 h达高峰(3.4883±0.1759),72 h仍维持较高的水平(1.6250±0.1157),与对照组比较,HIBD组各时间点MMP-9 mRNA的表达均明显升高,差异有显著性。
　　 ②对照组大鼠occludin mRNA表达水平较高(2.1780±0.0773),在HIBD3h其表达开始降低(1.7186±0.1168),24 h降至最低(0.9066±0.0602),72 h仍维持较低水平(1.5966±0.0799),与对照组比较,HIBD组各时间点occludinmRNA的表达均明显降低,差异有显著性。
　　 ③缺血缺氧后各时间点MMP-9 mRNA的表达与occludin mRNA的表达呈负相关。
　　 结论:
　　 1.新生大鼠HIBD模型制作成功。
　　 2.新生大鼠脑缺氧缺血损伤可诱导MMP-9 mRNA表达,occludin mRNA表达下降,提示它们可能参与了新生大鼠HIBD脑水肿的形成。
　　 3.新生大鼠脑缺氧缺血后各时间点MMP-9 mRNA的表达与occludinmRNA的表达呈负相关,提示MMP-9 mRNA可能引起occludin mRNA的下降,从而成为新生大鼠HIBD脑水肿的形成的重要机制之一。