甲基强的松龙对大鼠颅脑外伤后急性期危重病相关皮质类固醇不足的影响及意义

摘要

目的：体外培养刺激AFP特异性T细胞，检测其杀伤功能，为研究AFP158-166特异性T细胞免疫治疗奠定基础。
　　 方法：采用带FITC荧光标记的HLA-A2抗体，流式细胞技术筛选HLA-A2阳性健康志愿者，通过HLA-A2基因分型高分辨检测试剂盒(PCR-SSP)，选择其中基因型为HLA-A0201者，取其外周血，密度梯度离心法分离获取外周血单核细胞(PBMC)，通过加入人GM-CSF、IL-4及TNF-α等细胞因子贴壁粘附培养法培养收获树突状细胞(DC)，将DC负载HLA-A0201表位态AFP158-166后，按1:10比例将其与新鲜淋巴细胞混合培养，并加入人细胞因子IL-2刺激，出现细胞大量增殖后收获细胞，行细胞毒性试验，用MTT法分别检测其杀伤肝癌细胞、负载AFP的T2细胞，以及未负载AFP的T2的能力。
　　 结果：从13例健康志愿者中筛选出基因型HLA-A0201阳性者4例，每50ml外周血培养的细胞中可收获DC细胞2×106个，培养至第7天检测表面抗原：CD83、CD80和CD86阳性率分别为(81.3±2.4)％、(92.8±1.4)％和(70.5±1.9)％。将DC负载AFP与淋巴细胞混合培养14d左右出现大量细胞增殖，行细胞毒性试验结果示，其对肝癌细胞、负载AFP的T2细胞有明显杀伤作用，而对未负载AFP的T2细胞杀伤作用不明显。
　　 结论：通过加入GM-CSF、IL-4及TNF-α等细胞因子体外贴壁粘附培养人PBMC可收获树突状细胞，将树突状细胞负载AFP158-166后与淋巴细胞混合，加细胞因子IL-2可刺激AFP158-166特异性T细胞增殖，并且可杀伤AFP+肝癌细胞以及负载AFP的T2细胞，为研究肝癌的过继细胞免疫治疗提供了实验基础。