MiR-200a靶向CTNNB1抑制SGC7901人胃癌细胞生长侵袭能力的体外研究

摘要

微RNA(microRNAs；miRNA)是一类长度约为21～23nt的单链非编码小分子RNA，广泛存在于真核生物体内，通过miRNA的“种子”序列与靶基因3'非翻译区特异性结合来抑制蛋白翻译或导致靶mRNA降解的形式调节转录后的基因表达。最近研究表明，miRNA通过调节信号通路的活性参与多种肿瘤的形成、发展、侵袭转移及增殖等，特别是上皮来源的肿瘤。miRNA和Wnt/β-catenin信号通路的相互作用关系成为近年研究的热点。
　　Wnt/β-catenin信号通路的异常激活使细胞获得无限增殖的能力，导致肿瘤的形成。Wnt/β-catenin信号通路的活性紊乱是许多上皮来源恶性肿瘤的共同特征，在这些肿瘤中，信号通路的主要成分β-catenin或多蛋白降解复合物(APC、AXIN和GSK3β)的突变等，导致了β-catenin在细胞内的聚集及Wnt/β-catenin信号通路的激活。
　　近年来人们发现许多新的基因参与Wnt/β-catenin信号通路活性的调控，目前这方面研究主要集中在miRNA在调控wnt/β-catenin通路中的作用。一些miRNAs作为癌基因或抑癌基因参与Wnt/β-catenin信号通路的调控，其中，miR-200a可以抑制β-catenin介导的转录，但其作用机制目前尚不明确。
　　本实验中，我们用miR-200a mimics、miR-200a inhibitor上调或下调miR-200a的表达，观察胃腺癌细胞系SGC7901中Wnt/β-catenin信号通路活性出现的相应改变。应用TOP/FOP荧光素酶试验检测Wnt/β-catenin通路转录活性；3'UTR荧光素酶报告实验验证CTNNB1(β-catenin的编码基因)为miR-200a的直接作用靶点；增殖、周期、迁移、侵袭等试验验证miR-200a的生物学功能；蛋白印迹法验证miR-200a在上皮间质转化中的作用。
　　实验结果显示，miR-200a通过调控Wnt/β-catenin信号通路及下游基因影响SGC7901细胞系的生物学功能；CTNNB1是miR-200a的靶基因；miR-200a抑制SGC7901细胞的上皮问质转化。