臭氧对口腔综合治疗台水道系统中HBV灭活效果的实验研究

摘要

目的：探讨能够限时灭活口腔综合治疗台水道中乙肝病毒的最低臭氧溶液浓度。拟用多种方法控制溶液的臭氧浓度的稳定，将配制的不同浓度臭氧溶液同人肝癌细胞系(HepG2)的2.2.15细胞共同培养后提取其上清液，聚合酶链式反应(PCR)扩增，荧光定量(FQ-PCR)检测HVB-DNA的浓度，对各浓度臭氧溶液的灭活效果进行比较。并观察并不同浓度臭氧溶液对正常口腔上皮细胞的影响。为臭氧在DUWLs的感染控制的临床应用提供理论基础。
　　方法：1、臭氧溶液的配置与浓度衰减实验；
　　2、HepG2.2.15细胞的培养：常规培养HepG2.2.15细胞；
　　3、不同浓度的臭氧溶液对HepG2.2.15细胞株表达物的作用；
　　4、臭氧溶液对正常口腔组织的细胞形态学及细胞毒性实验；
　　5、统计学分析：采用单因素方差分析统计学方法，两组组间比较采用SNK-q检验。
　　结果：1、不同封闭条件和放置时间的臭氧浓度变化：臭氧溶液放置30min后，各组浓度变化差异有统计学意义(F=9.77，P<0.01)。在密封条件下，水温为5℃和水温为10℃时臭氧浓度比较差异无统计学意义(q=1.36，P>0.05)；密封条件下，水温为5℃与水温20℃时臭氧浓度比较差异有统计学意义(q=4.88，P<0.01)。水温为5℃时，密封和非密封臭氧浓度差异无统计学意义(q=0.59，P>0.05)；水温为20℃时，密封和非密封臭氧浓度差异有统计学意义(q=3.37，P<0.01)。
　　2、臭氧溶液对HepG2.2.15细胞上清液中HBV-DNA含量PCR荧光结果示：臭氧溶液能够明显减少HepG2.2.15上清液中HBV-DNA含量。相同时间内不同浓度臭氧溶液对HBV-DNA含量的影响不同，臭氧溶液浓度越大，其对HepG2.2.15细胞HBV-DNA的表达抑制越明显。
　　3、细胞培养上清液中HVB-DNA检测结果：臭氧溶液组比超纯水对照组HBV-DNA量明显降低。在臭氧作用1min时，臭氧浓度为1.5mg/L组和其他各组相比，差异均有统计学意义(均P<0.01)；臭氧分别作用5、10、15、30min时，各组臭氧溶液均能降低HVB-DNA含量，超纯水组和其他各组间差异有统计学意义(均P<0.01)；臭氧作用15min后，臭氧溶液各组间差异无统计学意义(均P>0.05)。
　　4、臭氧溶液对Hela细胞作用的细胞的形态学观察：经倒置显微镜检测Hela细胞贴壁生长呈星形，棱形，细胞形态良好，胞体透亮，呈典型贴壁不规则形态，加入低浓度(0.5mg/L、0.6mg/L)臭氧溶液后，对细胞形态无明显影响，加入中浓度(1.5mg/L)臭氧溶液后细胞出现颗粒，有少部分胞体变小，提示细胞状态受到一定程度影响。加入甲醛甲酚溶液后细胞形态明显破坏，出现大量细胞碎片，提示细胞大量死亡，破坏严重。
　　5、臭氧溶液对细胞增殖的影响：MTT结果显示，阴性对照组同低浓度臭氧溶液组(0.5mg/L、0.6mg/L)细胞相对增殖率均在100～103％之间，毒性评级为0级，其他1组中浓度臭氧溶液(1.5mg/L)细胞相对增值率在75％～99％之间，毒性评级为1级。阳性对照组的细胞相对增值率在1～24％之间，毒性评级为4级，3组臭氧溶液的安全性为合格。
　　结论：1、水温、容器是否密闭都会影响臭氧浓度，水温越高臭氧浓度变化越快，容器密闭时，臭氧浓度稳定。
　　2、臭氧溶液能够有效的灭活HBV-DNA，并且臭氧浓度越高，其对HBV-DNA的灭活作用越强。臭氧浓度为0.6mg/L10min及0.5mg/L15min能将设定浓度的HVB-DNA灭活。
　　3、3、0.5mg/L、0.6mg/L的臭氧溶液对口腔正常组织无毒性作用，可以应用于DUWLs的消毒。