口腔综合治疗台水路微生物、生物膜检测及其消毒效果的实验研究

摘要

口腔综合治疗台水路(DentalUnitWaterLines,DUWL)存在严重的微生物污染，微生物以浮游微生物和生物膜两种形式存在。微生物污染来源主要包括：供水源本身存在微生物污染、综合治疗台口腔设备回吸作用致微生物倒流入水路和供水管内壁的生物膜释放微生物造成的污染。大量研究证实，水路中存在铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌、非结核分枝杆菌、假丝酵母菌属等多种条件致病菌，可能引起医院感染的发生。研究表明，通过对口腔综合治疗台水路进行消毒等处理，可降低微生物浓度，一定程度上预防和控制医院感染的发生，从而保证医患安全。 目的：本实验拟对独立水源和市政水源两种供水方式的口腔综合治疗台三用枪喷头采集的水样进行微生物基线值定量检测、微生物种类鉴定及对铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌、大肠埃希氏菌三种条件致病菌定性检测，并观察生物膜结构。采用525mg/L次氯酸钠对独立水源水路进行化学消毒，比较其消毒前后水路微生物总菌落数、微生物种类、三种条件致病菌检出率的差异及生物膜结构的变化，以研究次氯酸钠消毒剂对水路消毒的效果和方法，进一步认识水路消毒的必要性，同时为本学科在DUWL的感染控制方面提供消毒学、流行病学等理论基础与实验依据。 方法：选择40台口腔综合治疗台，采集三用枪水样进行营养琼脂培养48h计算总菌落数；采用触酶实验、生化鉴定、VITEK-全自动微生物鉴定仪等方法检测水样中微生物种类，并按国家标准对铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌、大肠埃希氏菌三种条件致病菌进行定性检测。同时，从口腔综合治疗台水路三用枪近工作端连接管内壁采集生物膜样本，通过细菌培养检测生物膜中微生物的总菌落数，并采用激光共聚焦扫描显微镜(ConfocalLaserScanningMicroscopy,CLSM)和扫描电镜(ScanningElectronicMicroscope,SEM)观察生物膜结构。选用525mg/L次氯酸钠消毒剂，采用冲洗消毒方法对独立水源口腔综合治疗台水路进行化学消毒后，采集水样和生物膜样，进行细菌培养并菌落计数、鉴定微生物种类及定性检测水样中三种条件致病菌的检出率，并观察生物膜结构。结果采用SPSS10.0统计软件进行两样本t检验、配对t检验和单因素方差分析，α设在0.05。 结果：①消毒前DUWL微生物菌落数基线检测结果：独立水源和市政水源口腔综合治疗台水路的总菌落数几何均值分别为2.23×103CFU/ml和5.32×103CFU/ml，统计分析显示，差别无统计学意义(P>0.05)，均超过美国牙医学协会(AmericanDentalAssociation，ADA)口腔医疗用水的标准(菌落数≤200CFU/ml)。独立水源和市政水源口腔综合治疗台水路分别鉴定出八种和十二种细菌，优势菌为革兰氏阴性杆菌，如皮氏/汤氏罗尔斯顿菌、鲁氏/琼氏不动杆菌、醋酸钙-鲍氏不动杆菌等。所检测的三种条件致病菌检出结果为：独立水源与市政水源DUWL铜绿假单胞菌检出率分别为35％(7/20)和30％(6/20)，大肠埃希氏菌检出率分别为0和15％(3/20)；所有水样均未检出嗜肺军团菌。消毒前独立水源和市政水源DUWL生物膜总菌落数几何均值分别为1.7×103CFU/cm2和9.5×103CFU/cm2，P>0.05，差别无统计学意义。CLSM及SEM观察结果显示，独立水源和市政水源口腔综合治疗台水路内壁生物膜结构相似，呈栅栏状，并伴有杆菌与球菌分布于基质中。②独立水源DUWL消毒5周，每周微生物总菌落数几何均值均为0，与消毒前基线比较，差别有统计学意义(P<0.05)，消毒后所有口腔综合治疗台水路水样总菌落数均符合ADA口腔医疗用水水质要求。消毒后独立水源口腔综合治疗台水路水样中鉴定出三种细菌，其中泡囊短波单胞菌(Brevundimonasvesicularis)和施氏假单胞菌(Pseudomonasstutzeri)消毒前未检出。三种条件致病菌均未检出。独立水源口腔综合治疗台水路消毒前、后生物膜菌落数几何均值分别为1.7×103CFU/cm2、0CFU/cm2，差别有统计学意义(p<0.05)。CLSM及SEM观察结果显示，生物膜结构受到一定程度破坏，但基质仍然存在。 结论：①口腔综合治疗台水路存在微生物污染，并且检出铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌两种条件致病菌，同时口腔综合治疗台水路内壁生物膜含有高密度细菌，存在引起医院感染的潜在风险，为保证医疗安全，有必要对口腔综合治疗台水路进行消毒处理。②525mg/L次氯酸钠消毒剂对口腔综合治疗台水路具有较好的消毒效果，能有效地杀灭微生物与条件致病菌，并在一定程度上破坏生物膜结构。次氯酸钠消毒剂可常规应用于临床口腔综合治疗台水路的消毒处理。③市政水源口腔综合治疗台水路与市政水系统直接相连，目前没有消毒处理的方法，国际上已经淘汰，由于各种原因我国仍然普遍使用，此实验结果提示应该得到改进。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

引言

1.DUWL微生物

2.DUWL生物膜

3.DUWL水质要求、水路消毒方法及消毒剂

第一章口腔综合治疗台次氯酸钠消毒前、后水路微生物总菌落数及微生物种类的检测

1.1材料与仪器

1.2实验方法

1.3 结果

1.4讨论

1.5本章小结

第二章独立水源DUWL次氯酸钠消毒前、后及市政水源生物膜总菌落数及结构的检测

2.1试剂与仪器

2.2实验方法

2.3 实验结果

2.4讨论

2.5本章小结

全文总结

参考文献

附录1

发表论文一

发表论文二

附录2:每日牙椅水路（DUWL）化学处理操作程序及执行情况表

致 谢