替米沙坦改善高脂饲养OLETF大鼠胰岛素抵抗并调节大鼠循环脂肪细胞因子水平

摘要

目的：探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype1receptor，AT1R)拮抗剂替米沙坦对高脂喂养OLETF(otsukalong-evanstokushimafatty，OLETF)大鼠2型糖尿病(Type2DiabetesMellims，T2DM)的预防作用，以及对大鼠胰岛素抵抗和糖脂代谢的影响。观察替米沙坦对高脂喂养OLETF大鼠循环脂肪细胞因子水平的调控作用。
　　方法：4周龄雄性OLETF(otsukalong-evanstokushimafatty)大鼠47只，同系同周龄LETO(long-ewanstokushimaotsuka)大鼠12只，体质量为150～200g，均为日本大冢制药有限公司研究所惠赠，于清洁级环境以标准饲料适应性饲养4周。OLETF大鼠于8周龄开始给予高脂饲料喂养。至16周龄，进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)，各组大鼠均未出现糖耐量异常，根据OGTT2h血糖和体重将OLETF大鼠随机分为5组：①无干预的OLETF大鼠(IR组)，共10只；②二甲双胍干预的OLETF大鼠(MET组)，共10只，给予二甲双胍(100mg·kg-1·d-1)；③吡格列酮干预的OLETF大鼠(P组)，共8只，给予吡格列酮(10mg·kg-1·d-1)；④替米沙坦干预的OLETF大鼠(L组)，共10只，给予替米沙坦(5mg·kg-1·d-1)；⑤低剂量替米沙坦干预的OLETF大鼠(VL组)，共9只，给予替米沙坦(0.5mg·kg-1·d-1)。LETO大鼠(NC组)，共12只。22周龄时再次复查OGTT，全部OLETF大鼠均发生胰岛素抵抗。开始药物干预共26周，每日1次灌胃，对照组大鼠以等量蒸馏水灌胃，48周龄处死大鼠。观察：1.体重变化：自20周龄始每两周称重一次。2.血清指标：生化法测定血清游离脂肪酸、总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇等代谢指标；葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖；ELISA法测定空腹胰岛素、血清视黄醇结合蛋白4(Retinol-bindingprotein4，RBP4)、网膜素、内脂素水平。所有结果均采SPSS18.0软件分析处理。
　　结果：1.各组大鼠2型糖尿病发病率比较：各组大鼠2型糖尿病发病率不同，差异有统计学意义(x2=36.501，P=0.000)，且L组与IR组比较有下降趋势。2.各组大鼠体重比较：自20周龄开始，IR组、MET组、P组、L组和VL组间大鼠体重无明显差别，但IR组、MET组、P组、L组和VL组体重均明显高于NC组，差异有统计学意义(P<0.05)。至34周龄开始，L组体重较IR组和MET组有下降趋势，差异无统计学意义(P值分别为0.809和0.476)；L组体重较P组明显下降，差异有统计学意义(P=0.000)。
　　3.各组大鼠糖脂代谢指标比较：①IR组与NC组比较，游离脂肪酸、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、空腹胰岛素和HOMA-IR明显升高，差异有统计学意义(P值分别为0.001、0.036、0.000、0.000、0.011和0.000)；ISI明显降低，差异有统计学意义(P=0.000)。
　　②L组与IR组比较，游离脂肪酸、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖和HOMA-IR明显降低，差异有统计学意义(P值分别为0.005、0.029、0.000、0.031和0.022)；ISI明显升高，差异有统计学意义(P=0.017)。
　　③VL组与IR组比较，游离脂肪酸和低密度脂蛋白胆固醇明显降低，差异有统计学意义(P值分别为0.041和0.000)。
　　④P组与IR组比较，总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖和HOMA-IR明显降低，差异有统计学意义(P值分别为0.004、0.001、0.001和0.001)；ISI明显升高，差异有统计学意义(P=0.001)。
　　⑤L组与MET组比较，游离脂肪酸、总胆固醇、空腹血糖、空腹胰岛素和HOMA-IR明显降低，差异有统计学意义(P值分别为0.000、0.039、0.06、0.008和0.006)；ISI明显升高，差异有统计学意义(P=0.004)。
　　⑥L组与P组比较，游离脂肪酸、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR和ISI比较，差异均无统计学意义。
　　4.各组大鼠循环脂肪细胞因子水平的比较：①IR组网膜素明显低于NC组、MET组、L组和VL组，差异有统计学意义(P值分别为0.000、0.026、0.000和0.006)；内脂素明显高于NC组、P组、L组和VL组，差异有统计学意义(P值分别为0.001、0.007、0.002和0.026)；RBP4明显高于NC组和L组，差异有统计学意义(P值分别为0.000和0.000)。
　　②L组网膜素明显高于MET组和P组，差异有统计学意义(P值分别为0.07和0.024)；内脂素明显低于MET组，差异有统计学意义(P=0.013)；RBP4明显低于MET组、P组和VL组，差异有统计学意义(P值分别为0.000、0.006和0.009)。
　　5.脂肪细胞因子水平的直线相关分析：①网膜素与RBP4和内脂素呈负相关(r分别为-0.418和-0.415，均P<0.01)：②内脂素与HOMA-IR、游离脂肪酸和RBP4呈正相关(r分别为0.332、0.270和0.304，均P<0.05)，与ISI和网膜素呈负相关(r分别为-0.316和-0.415，均1<0.05)；③RBP4与空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、游离脂肪酸和内脂素呈正相关(r分别为0.465、0.400、0.534、0.294和0.304，均P<0.05)，与ISI和网膜素呈负相关(r分别为-0.567和-0.148，均P<0.01)。
　　6.多元线性逐步回归分析：①以网膜素水平为因变量进行多元线性逐步回归分析，结果显示RBP4和内脂素是网膜素水平的独立影响因素。回归方程：Y＾=248.282-0.52XRBP4-0.118Xvisfatin。
　　②以RBP4水平为因变量进行多元线性逐步回归分析，结果显示ISI和网膜素是RBP4水平的独立影响因素。回归方程：Y^=84.799-10.955XISI-0.192Xomentin。
　　③以内脂素水平为因变量进行多元线性逐步回归分析，结果显示HOMA-IR和网膜素是内脂素水平的独立影响因素。回归方程：Y^=645.924-1.008Xomentin+2.371XHOMA-IR。
　　结论：1.通过对OLETF大鼠的早期高脂饲养，成功建立了具有胰岛素抵抗及空腹高血糖的T2DM动物模型。
　　2.高脂饲养使OLETF大鼠血清游离脂肪酸、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、空腹胰岛素和HOMA-IR明显升高，ISI明显降低；同时显著上调血清RBP4和内脂素水平并下调网膜素水平。
　　3.经过替米沙坦干预，可以改善OLETF大鼠的糖脂代谢紊乱和胰岛素抵抗状态，降低OLETF大鼠的T2DM发病率。替米沙坦对OLETF大鼠循环脂肪细胞因子的表达具有调控作用，可能通过降低血清RBP4和内脂素，提高网膜素的表达改善大鼠胰岛素抵抗。
　　4.通过与二甲双胍和吡格列酮比较，显示替米沙坦在对大鼠循环脂肪细胞因子的调控方面更具优越性。