血小板膜P2X1受体介导的血小板活化与急性冠脉综合症的相关性研究

摘要

目的：
　　冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronaryatheroscleroticheartdisease，CHD)是一种病因复杂的多因素疾病，与血小板活化及凝血纤溶系统异常密切相关。冠状动脉内血栓形成是急性冠脉综合症(acutecoronarysyndrome，ACS)显著的病理特征。在血栓形成过程中，腺嘌呤核苷三磷酸(adenosinetriphosphate，ATP)及其受体P2X1是最近发现的在血小板激活功能中起着重要作用的内源性血小板介质和受体，是一个潜在的血栓治疗靶点。本研究采用病例对照研究方法：首先明确了血小板膜P2X1受体在ACS发生过程中的表达水平；然后探讨了ACS发生时，由P2X1受体信号传导通路介导的血小板活化引起的血小板钙离子、P-选择素和血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)水平的变化；最后观察了阿司匹林联合氯吡格雷治疗对血小板钙离子、P-选择素和GPⅡb/Ⅲa水平的影响，即对P2X1受体信号传导通路的抑制作用。
　　方法：
　　连续入选70例ACS患者为研究对象，其中急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction，AMI)患者30例，不稳定型心绞痛(unstableangina，UA)患者40例，以20例健康受试者为对照组。
　　应用逆转录PCR(reversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR)和荧光实时定量PCR方法，检测P2X1受体mRNA和GPⅡb/Ⅲa受体mRNA在对照组和ACS组血小板中的表达水平。
　　全部受试者入院抗血小板治疗前抽取前臂静脉血4ml，及一次性口服150mg阿司匹林和75mg氯吡格雷24小时后抽取前臂静脉血4ml进行血小板检测。分别以a，β-meATP(3μM)、低浓度胶原蛋白(1μg/ml)为激动剂激活血小板，以Fluo-3AMEster为标记物在荧光分光光度计下观察血小板钙离子水平变化及应用酶联免疫吸附法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)测定血小板P-选择素和GPⅡb/Ⅲa水平的变化。
　　结果：
　　对照组与ACS组的血小板中均有P2X1受体mRNA和GPⅡb/Ⅲa受体mRNA表达，P2X1受体mRNA和GPⅡb/Ⅲa受体mRNA在ACS组的表达较对照组高(P<0.05)；但AMI组与UA组P2X1受体mRNA和GPⅡb/Ⅲa受体mRNA表达水平的差异均无统计学意义(P>0.05)。
　　ACS组患者钙离子基线水平高于对照组(P<0.05)，抗血小板治疗后，ACS组与对照组钙离子水平均较治疗前降低(P<0.05)，但ACS组钙离子水平下降幅度低于对照组(P<0.05)；其中，AMI组血小板钙离子基线水平较UA组高(P<0.05)，抗血小板治疗后AMI组与UA组血小板钙离子水平均较治疗前降低(P<0.05)，下降幅度的差异有统计学意义(P<0.05)。
　　ACS组患者P-选择素基线水平高于对照组(P<0.05)，抗血小板治疗后，ACS组与对照组P-选择素水平较治疗前降低(P<0.05)，但ACS组P-选择素水平下降幅度低于对照组(P<0.05)；其中，AMI组与UA组P-选择素基线水平的差异无统计学意义(P>0.05)，抗血小板治疗后AMI组与UA组血小板P-选择素水平均较治疗前降低(P<0.05)，下降幅度的差异无统计学意义(P>0.05)。
　　ACS组患者GPⅡb/Ⅲa基线水平高于对照组(P<0.05)，抗血小板治疗后，ACS组与对照组GPⅡb/Ⅲa水平较治疗前降低(P<0.05)，但ACS组GPⅡb/Ⅲa水平下降幅度低于对照组(P<0.05)；其中，AMI组与UA组GPⅡb/Ⅲa基线水平的差异无统计学意义(P>0.05)，抗血小板治疗后AMI组与UA组血小板GPⅡb/Ⅲa水平均较治疗前降低(P<0.05)，下降幅度的差异无统计学意义(P>0.05)。
　　结论：
　　ACS发生时，P2X1受体mRNA表达增高，大量P2X1信号传导通路被激活，使血小板活化，导致血小板钙离子、P-selectin、GPⅡb/Ⅲa水平升高；阿司匹林联合氯吡格雷治疗可降低血小板钙离子、P-selectin、GPⅡb/Ⅲa水平，一定程度上抑制了P2X1信号传导通路。因此，血小板膜P2X1受体活化介导的血小板高活状态及由此引起的血小板钙离子、P-selectin、GPⅡb/Ⅲa水平升高在急性冠脉综合症的发生发展过程中起重要作用。