卵巢癌CD47表达水平及靶向治疗的体外研究

摘要

目的:①明确CD47在卵巢癌中的表达情况，分析其与临床病理参数的关系，为CD47单克隆抗体应用于卵巢癌的靶向治疗提供理论依据。②探讨CD47单克隆抗体对巨噬细胞吞噬卵巢癌细胞的作用，为CD47单克隆抗体治疗卵巢癌提供实验依据。③初步研究ALDH+/ALDH-卵巢癌细胞CD47的表达情况，为后续针对卵巢癌干细胞的研究提供实验基础。
　　 方法:①应用流式细胞术检测CD47在人卵巢癌细胞系SKOV-3及正常卵巢组织细胞和卵巢癌组织细胞中的表达情况，分析其与卵巢癌患者临床病理参数的关系，明确其在卵巢癌的临床意义。②通过细胞形态学、CD14免疫表型、鸡红细胞吞噬实验分析小鼠巨噬细胞、人外周血巨噬细胞和人脐血巨噬细胞三种巨噬细胞活性的情况。③应用细胞功能学实验通过免疫荧光显微镜观察CD47单克隆抗体对巨噬细胞吞噬卵巢癌细胞和SKOV-3细胞的作用。④应用流式细胞术检测ALDH+卵巢癌干细胞的比例，并分析卵巢癌ALDH+/ALDH-细胞CD47的表达情况。
　　 结果:①CD47表达水平于人卵巢癌细胞系SKOV-3（CD47平均荧光强度值47.44±4.55）和卵巢癌细胞中（CD47平均荧光强度值17.00±10.93）均明显高于正常卵巢组织细胞（CD47平均荧光强度值3.03±1.14），差异具有统计学意义(P＜0.05);并且其表达水平与卵巢癌患者年龄、病理类型无明显联系，差异无统计学意义(P＞0.05)，而与疾病的临床分期、病理分化程度具有明显联系，差异具有统计学意义(P＜0.05)。②三种来源的巨噬细胞中人脐血巨噬细胞较小鼠巨噬细胞及人外周血巨噬细胞相比，其培养条件复杂，变量因素较多，并且吞噬功能明显对比小鼠巨噬细胞及人外周血巨噬细胞较弱。因此后续的细胞功能实验应用小鼠巨噬细胞及人外周血巨噬细胞进行体外实验。③巨噬细胞与卵巢癌肿瘤细胞共培养的体外细胞功能学实验表明CD47单克隆抗体可明显促进巨噬细胞对卵巢癌肿瘤细胞的吞噬作用，差异具有统计学意义(P＜0.05)，而同抗体本身的作用及HLA机制介导的免疫作用无明显关系(P＞0.05);随着应用CD47单克隆抗体浓度的改变，其吞噬指数呈明显的浓度依赖性，随抗体浓度的增加，吞噬作用加强，差异具有统计学意义(P＜0.05)，当抗体浓度于10μg/mL时表现为吞噬效率最大，吞噬指数0.35（±0.09），这可能与抗体浓度达到饱和的状态有关。④流式细胞术分析的7例卵巢癌组织细胞标本中ALDH+卵巢癌干细胞的比率很少（1.65±1.27）％，ALDH+细胞的CD47表达水平（19.85±3.80）明显高于ALDH-细胞（13.06±5.88），差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论:①CD47高表达于卵巢癌细胞，并与疾病的临床分期、病理分化程度有关。②CD47单克隆抗体在体外可明显促进巨噬细胞对卵巢癌细胞的吞噬作用，并与抗体浓度成剂量依赖性。③卵巢癌中ALDH+细胞CD47的表达水平较ALDH-细胞高，为卵巢癌干细胞的研究提供了实验依据。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

对象和方法

1．1 研究对象

1．2 研究方法

1．2．1 实验材料

1．2．2 实验方法

1．3 统计方法

结果

2．1 CD47在卵巢癌中呈高表达并与疾病的病理分化和临床分期有关

2．2 人外周血／小鼠巨噬细胞较人脐血来源的巨噬细胞其吞噬效率高

2．3 CD47单克隆抗体可明显促进巨噬细胞对卵巢癌细胞的吞噬

2．4 卵巢癌中ALDH+细胞CD47的表达水平较ALDH-细胞高

讨论

3．1 CD47的表达水平在卵巢癌中的临床意义

3．2 不同来源的巨噬细胞的比较

3．3 CD47单克隆抗体对巨噬细胞吞噬作用的影响

3．4 卵巢癌ALDH+／ALDH-细胞CD47表达情况的比较

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 CCD47及卵巢癌干细胞分离鉴定的研究进展

致谢