转基因作物致敏性评价啮齿类动物模型研究

摘要

随着转基因技术的迅速发展，全球范围内转基因作物商业化进程不断推进，对其进行食用安全性评价意义重大。致敏性评价是食用安全性评价中的重要环节，其中动物体内试验是最为直接的方法。目前国内外已对动物模型进行诸多探索，尤以啮齿类动物为多，但尚无公认结论，有待更为深入的研究。
　　目的：
　　探索并建立适用于转基因作物致敏性评价的啮齿类动物模型，应用该模型评价两种转基因作物致敏性，为转基因作物食用安全性评价提供科学依据。
　　方法：
　　1、转基因作物致敏性评价啮齿类动物模型的建立
　　比较不同品系动物和不同致敏途径的敏感性、筛选敏感阳性蛋白、确定阳性蛋白剂量。以PBS为溶剂对照经口灌胃，Balb/c小鼠经口或腹腔暴露不同受试蛋白（酪蛋白、OVA、PNA、STI），BN大鼠经口暴露不同受试蛋白(酪蛋白、OVA、PNA、STI)和不同剂量OVA(0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mg/d)，第42天相同致敏途径给予PBS或蛋白刺激溶液。喂饲无过敏原基础饲料，连续饲养42天。观察动物一般情况，ELISA法测定第28和42天血清IgG、IgE抗体水平，试验结束时称重并计算BN大鼠免疫器官脏器系数。
　　2、转基因作物致敏性评价动物模型的应用
　　应用致敏动物模型评价转HJC-1和G6-EPSPS基因大米和转FBP7-iaaM基因棉籽的致敏性。将转HJC-1和G6-EPSPS基因大米外源基因表达蛋白HJC-1和G6-EPSPS蛋白、转FBP7-iaaM基因棉籽外源基因表达蛋白FBP7-iaaM蛋白分别经口灌胃给予BN大鼠42天，转HJC-1和G6-EPSPS基因大米及其亲本对照9746大米、转FBP7-iaaM基因棉籽及其亲本对照冀棉14棉籽喂养BN大鼠42天。观察动物一般情况，ELISA法测定第28和42天血清IgG、IgE抗体水平和肠组织组胺含量，试验结束时称重并计算BN大鼠免疫器官脏器系数。
　　结果：
　　1、转基因作物致敏性评价啮齿类动物模型的建立
　　(1)与溶剂对照组比较，腹腔注射0.2mg/d STI的Balb/c小鼠第28和42天血清IgG抗体水平高于溶剂对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，但血清IgE抗体水平与溶剂对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);经口灌胃0.2mg/d PNA组第28天血清IgG抗体水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，但血清IgE抗体水平与溶剂对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　(2)STI、PNA、OVA经口给予BN大鼠，与溶剂对照组比较，OVA能诱发血清IgG和IgE抗体水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　(3)以0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mg/d剂量OVA经口灌胃BN大鼠，与溶剂对照组比较，1.0mg/d剂量第28和42天血清IgG、IgE抗体水平均升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，2.0mg/d剂量仅第28天血清IgG抗体水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，但血清IgE抗体水平与溶剂对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　(4)1.0mg/d剂量的OVA多批次经口灌胃BN大鼠第28和42天血清IgG、IgE抗体水平均升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，具有良好的重现性。
　　2、转基因作物致敏性评价啮齿类动物模型的应用
　　与溶剂对照组和饲养对照组比较，阳性对照组血清IgG和IgE抗体水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，试验体系可靠。重组蛋白组、转基因大米组、转基因棉籽组分别与溶剂对照组、饲养对照组、亲本对照组比较，血清IgG和IgE抗体水平差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：
　　1、BN大鼠比Balb/c小鼠敏感，OVA比其他受试蛋白敏感，1.0mg/d剂量比其他剂量稳定。故选定BN大鼠为受试动物、经口灌胃为致敏途径、OVA为阳性物、1.0mg/d为阳性物剂量，以BN大鼠经口暴露1.0mg/d OVA作为致敏动物模型。
　　2、通过HJC-1、G6-EPSPS、FBP7-iaaM三个重组蛋白经口灌胃及全食品喂饲，未发现转HJC-1和G6-EPSPS基因大米和转FBP7-iaaM基因棉籽对BN大鼠具有致敏性。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、转基因作物致敏性评价啮齿类动物模型的建立

1．1 对象和方法

1．1．1 主要试剂和仪器

1．1．2 实验动物及饲养环境

1．1．3 受试蛋白配制

1．1．4 动物分组及处理方法

1．1．5 观察指标及检测方法

1．1．6 统计分析

1．2 结果

1．2．1 动物一般情况观察

1．2．2 血清IgG和IgE抗体水平

1．2．3 不同批次BN大鼠经口暴露1．0 mg／d OVA血清IgG和IgE抗体水平

1．2．4 免疫器官脏器系数

1．3 讨论

1．3．1 食物过敏概述及发病机制

1．3．2 动物品系和致敏途径的筛选

1．3．3 对照蛋白种类和剂量的筛选

1．4 小结

二、转基因作物致敏性评价动物模型的应用

2．1 对象和方法

2．1．1 主要试剂和仪器

2．1．2 实验动物及饲养环境

2．1．3 受试作物来源及处理

2．1．4 动物分组及处理方法

2．1．5 观察指标及检测方法

2．1．6 统计分析

2．2 结果

2．2．1 动物一般情况观察

2．2．2 血清IgG和IgE抗体水平

2．2．3 肠组织组胺含量

2．2．4 免疫器官脏器系数

2．3 讨论

2．3．1 转HJC-1和G6-EPSPS基因大米对BN大鼠致敏性评价

2．3．2 转FBP7-iaaM基因棉籽对BN大鼠致敏性评价

2．4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述

致谢