辅助检查多发性骨髓瘤并发淀粉样变生物标志物的研究

摘要

目的:
　　多发性骨髓瘤并发淀粉样变患者可以在骨髓内形成淀粉样变沉积，本研究首先建立一种利用骨髓涂片能够检查淀粉样变的方法，以便鉴定多发性骨髓瘤患者并发骨髓淀粉样变沉积，以上述研究结果为基础，进一步系统分析多发性骨髓瘤并发骨髓淀粉样变以及骨髓淀粉样变阴性患者的生物标志物类型、表达水平变化特征。为辅助诊断多发性骨髓瘤并发骨髓淀粉样变提供实验室检查标志物和检测方法。
　　方法:
　　首先，选择天津医科大学肿瘤医院首先，选择多发性骨髓瘤诊治患者和大致正常骨髓像患者。依据临床体征、外周血细胞检查和骨髓细胞瑞氏染色结合骨髓细胞组织化学染色、细胞染色体检查和细胞免疫化学染色，诊断MM和大致正常骨髓象进行有核细胞染色分析和观察细胞形态。然后探索骨髓细胞进行刚果红染色条件，优化后分别进行利用H&E复染、瑞氏复色、苏木素复染对于观察淀粉样变沉积的影响染色和骨髓有核细胞染色效果。
　　其次，临床确定诊断MM患者44例，利用建立检查骨髓淀粉样变方法，对骨髓涂片刚果红染色结合偏振光，确定骨髓内淀粉样变沉积，将MM患者划分为淀粉样变阳性和阴性两组。利用SYSMEX XE-5100血液分析仪，测定血液RBC数量、WBC数量、Hb含量和PLT数量含量。西门子BNⅡ特种蛋白仪测定血清IgA，IgG, IgM，κ和λ含量。HITACHI7600全自动生化分析仪和配套试剂，检测血清LDH、LDH1、ALT、AST、mAST、ALP、GGT、CHE、ADA、AFU、GPDA、5-NT、TP、Alb、 Palb和Glo等16项生物化学标志物。常规生化项目。骨髓细胞瑞氏染色，依据细胞形态学对各种类型血细胞进行分类计数，分析骨髓各计算各系统系幼稚与成熟细胞及骨髓瘤细胞的数量。
　　结果:
　　(1)骨髓细胞经过单纯瑞氏染色，对有核细胞和RBC细胞胞浆染色效果良好，但对淀粉样变无亲和性，无法判断是否有淀粉样变沉积。(2)骨髓细胞淀粉样变刚果红染色后，结合瑞氏染色复染有核细胞，酒精脱水后细胞和结构模糊和染色变浅。(3)淀粉样变刚果红染色后，苏木素复染酒精脱水后，骨髓有核细胞染色效果良好，同时淀粉样变染色明显紫红色，染色效果良好，容易判断判读清楚。
　　免疫比浊法测定血清中免疫球蛋白水平，发现MM患者并发发现骨髓淀粉样变阳性患者，免疫标志物IgG含量明显低于阴性组，κ和λ含量均值有降低趋势，但是未见有统计学差异。分析血清生物化学标志物水平，发现骨髓淀粉样变阳性患者血清LDH和LD-1活性明显高于淀粉样变阴性组，同时外周血白细胞计数及单核细胞计数也出现淀粉样变阳性组高于阴性组(p＜0.05)的情况，而TP、Alb、ALT、AST、血液RBC、HGB和PLT数量等指标未见有统计学差异。
　　结论:
　　1.探讨了骨髓检查淀粉样变的方法，确定骨髓涂片刚果红染色后，利用苏木素复染，后酒精脱色对有核细胞核和细胞浆染色效果良好，建议苏木素染色用于骨髓淀粉样变检查的复染方法。利用此方法可以在诊断多发性骨髓瘤的同时鉴别骨髓淀粉样变，为进一步找到辅助诊断多发性骨髓瘤并发骨髓淀粉样变的实验室标志物奠定了技术基础。
　　2.比较发现多发性骨髓瘤并发骨髓淀粉样变与骨髓淀粉样变阴性患者体液免疫球蛋白IgA，IgG, IgM，κ和λ含量，只有体内免疫球蛋白IgG含量明显降低。
　　3.多发性骨髓瘤并发骨髓淀粉样变患者外周血白细胞总数计数、单核细胞总数计数明显增高，
　　4.分析血清LDH、LD-1、ALT、AST、mAST、ALP、GGT、CHE、ADA、AFU、GPDA、5-NT、TP、Alb、Palb和Glo等16项生物化学标志物，MM并发骨髓淀粉样变患者同时血清生化指标LHD和LDH-1也出现增高具有统计学意义现象。
　　5.因此可以判断检查免疫球蛋白G、外周血白细胞数量计数、单核细胞数量计数、LDH和LDH-1指标增高有可能作为辅助检查MM骨髓淀粉样变的生物标志物。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、建立检查骨髓中淀粉样变沉积的方法

1．1 对象和方法

1．1．1 研究对象

1．1．2 试剂

1．1．3 仪器

1．1．4 方法

1．2 结果

1．2．1 多发性骨髓瘤骨髓结果

1．2．2 比较骨髓瑞氏染色酒精脱色结果

1．2．3 组织刚果红染色苏木素复染结果

1．3 讨论

1．4 小结

二、分析多发性骨髓瘤并发淀粉样的生物学标志物

2．1 对象和方法

2．1．1 患者、试剂和仪器

2．1．2 方法

2．2 结果

2．2．1 分析MM患者骨髓并发淀粉样变

2．2．2 分析淀粉样变阳性患者血液细胞学特征

2．2．3 比较并发淀粉样变阴阳性患者间血清生物标志物

2．2．4 分析并发淀粉样变患者血清免疫标志物特征

2．2．5 分析并发淀粉样变患者骨髓细胞类型和比例

2．3 讨论

2．4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述 多发性骨髓瘤并发淀粉样变的最新研究进展

致谢