肝硬化大鼠部分肝切除后肝再生过程中HGF/C-met通路的差异性表达

摘要

目的: 通过大鼠部分肝切除模型研究完整的HGF/c-met通路及其相关因子在肝硬化和正常肝脏再生过程中的表达差异，探索硬化肝脏部分肝切除后肝再生缓慢的原因。
　　方法: 实验分为两部分:第一部分，建立肝硬化大鼠的部分肝切除模型:实验前期先利用四氯化碳诱导大鼠肝硬化，成模后行70％肝部分切除术。第二部分，研究HGF/C-met通路及其相关影响因子在大鼠肝硬化和正常肝脏再生中的表达差异:①实验大鼠为雄性SD大鼠，5-6周龄，体重200-220g。②实验大鼠分为2组:单纯行70％肝部分切除术组（N组），先使用CCl4诱导肝硬化后再行70％肝切除术组（C组），每组30只。两组均于术前及术后不同时间(3h、6h、12h、24h、48h)处死大鼠，每时段每组处死5只，采集血样和肝脏以及脾脏标本，标本置入-80℃冻存待检。③指标检测:病理学观察采用肝组织经10％福尔马林固定，石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察肝脏硬化程度;ELISA法检测血清中HGFA和HGF的含量;免疫组化染色检测C-met在术后肝脏中的阳性表达率;利用RT-PCR测定肝组织中HGF mRNA和C-met mRNA及脾源性HAI-1 mRNA、HAI-2 mRNA的水平。④数据用统计软件SPSS19.0软件进行统计学处理，结果以均数±标准差表示，采用独立样本t检验，检验水准α=0.05。
　　结果:
　　第一部分:肝硬化大鼠70％肝切除动物模型稳定，可以用于进行肝硬化个体肝切除术后再生的相关研究;
　　第二部分:1.HGF变化:术后各时间点C组血清HGF及肝HGF mRNA均显著高于N组(P＜0.05)，N组术后3h即开始升高，12h达高峰，C组术后12h开始升高，24h达高峰，随着时间推移，两组HGF均先升高后下降。
　　2.血清HGFA变化:术后各时间点C组血清HGFA水平均显著低于N组(P＜0.05)，两组大鼠血清HGFA均于术后12h降至最低水平，后逐渐回升，至48h恢复正常。
　　3.C-met变化:C组任一时间点的C-met蛋白及C-met mRNA的表达量均显著低于N组（P＜0.05），N组表达量在术后6h即开始下降，24h降至最低，后开始回升，C组自12h开始随时间推移不断降低。
　　4.HAI-1 mRNA变化:C组任一时间点的HAI-1 mRNA的表达量均显著高于N组（P＜0.05），两组表达量均术后6h即开始升高，12h达到高峰，然后逐渐回降至正常水平。
　　5.HAI-2 mRNA变化:任一时间点两组HAI-2 mRNA的表达量之间无明显差异（P＜0.05），同一组任意两时间点之间亦无统计学差异(P＜0.05)。
　　结论:
　　1、本研究通过大量预实验，选择了一种简便、易行且成模稳定的方法来诱导建立了大鼠肝硬化模型，后在此模型的基础上实施70％部分肝切除术。该动物模型可操作性强、成模率高，是研究肝硬化大鼠肝切除术后再生规律及其影响因素的理想模型。
　　2、与对照组相比，肝硬化组大鼠的HGF/C-met通路表达能力较低，且术后呈现出合成分泌延迟现象，这可能导致了硬化肝脏在部分肝切除术后较正常肝脏再生缓慢。
　　3、硬化肝脏PH后HGF的合成分泌减少受HGFA以及HAI-1的调控，三者之间可能存在反馈作用，但肝硬化个体HAI-1的持续高表达原因不明，需进一步深入研究。
　　4、HAI-2并没有参与到肝组织的损伤修复过程中。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、大鼠肝硬化模型及部分肝切除模型的建立

1．1 材料和方法

1．1．1 实验动物

1．1．2 主要实验试剂及仪器设备

1．1．3 手术器械

1．1．4 肝硬化大鼠模型制备

1．1．5 大鼠70％肝切除模型的建立

1．2 结果

1．2．1 肝硬化成模过程中大鼠的大体观

1．2．2 肝硬化成模后肝脏的形态及病理改变

1．2．3 部分肝切除术中大体改变

1．2．4 术后观察

1．2．5 建模及术后生存率观察以及死亡原因分析

1．3 讨论

1．3．1 建立肝硬化大鼠肝部分切除动物模型的价值

1．3．2 大鼠肝硬化模型的建立及依据

1．3．3 大鼠70％部分肝切除模型的建立及依据

1．3．3 模型建立的难点及成功的关键

1．3．4 模型的可行性及稳定性

1．4 小结

二、HGF/c-met通路在肝硬化大鼠部分肝切除术后肝再生过程中的差异性表达

2．1 对象和方法

2．1．1 实验动物

2．1．2 主要实验试剂及仪器设备

2．1．3 实验方法

2．1．4 标本取材和处理

2．1．5 指标检测

2．1．6 统计学方法

2．2 结果

2．2．1 大鼠一般状态及肝再生情况观察

2．2．2 两组大鼠血清HGF的变化

2．2．3 两组大鼠血清HGFA的变化

2．2．4 两组大鼠肝脏中C-met蛋白免疫组化阳性表达率的变化

2．2．5 两组肝组织各个时间点HGF mRNA的表达情况

2．2．6 两组肝组织各个时间点C-met mRNA的表达情况

2．2．7 两组脾源性HAI-1 mRNA的表达情况

2．2．8 两组脾源性HAI-2 mRNA的表达情况

2．3 讨论

2．3．1 探讨硬化肝脏部分切除术后再生的意义

2．3．2 动物模型的选择

2．3．3 HGF／C-met通路在肝再生过程中的作用

2．3．4 HGF／C-met通路相关的影响因子

2．3．5 HGF／C-met通路在硬化肝脏切除后再生过程中表达的研究现状

2．3．6 本次实验中相关因子检测方法的选择

2．3．7 实验结果分析

2．3．8 本研究的不足与展望

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 部分肝切除术后肝再生的最新研究进展

致谢