淤血对大鼠部分肝切除后早期肝再生的影响

摘要

[目的]在部分肝切除的基础上建立大鼠独立肝叶淤血的动物模型，观察淤血对大鼠部分肝切除后早期肝再生和肝功能的影响。
　　 [方法]实验分为两部分：第一部分，建立大鼠独立肝叶淤血动物模型：实验前期进行大鼠肝脏解剖学研究，熟悉大鼠肝脏解剖，建立大鼠独立肝叶淤血动物模型。第二部分，研究淤血对大鼠早期肝切除术后肝再生的影响：①实验大鼠为雄性Wistar大鼠，6-8周龄，体重200-220g，术前均不禁水、食。建立70％肝切除合并尾状叶淤血动物模型与50％肝切除合并右中叶淤血动物模型。②实验大鼠分为4组：70％肝切除合并尾状叶淤血组(A1组)，70％肝切除组A2组(A1组的对照组)，50％肝切除组合并右中叶淤血组(B1组)，50％肝切除组B2组(B1组的对照组)，每组24只。术后不同时间(1d、2d、3d、5d)处死大鼠，每时段每组处死6只，采集血样和肝脏标本，取样前仔细称量移植物重量。标本置入-80℃冻存以备进一步分析。③相关指标检测：测血清ALT水平，评估肝细胞损伤的程度(自动生化分析仪)；病理学观察采用肝组织经10％福尔马林固定，石蜡包埋，制成4μm厚的切片，HE染色，光镜下观察不同肝叶病理变化；免疫组化染色检测PCNA并计算PCNA指数，流式细胞术检测细胞周期并计算肝脏S期细胞比率；肝组织TNF-α测定及血中肝细胞生长因子测定采用相应试剂盒说明方法进行测定。④数据用统计软件SPSS17.0软件进行统计学处理，结果以均数±标准差表示，采用独立样本t检验，检验水准α=0.05。
　　 [结果]
　　 第一部分：部分肝切除联合独立肝叶淤血动物模型稳定，可以用于进行相关研究；
　　 第二部分：1.病理变化：实验组淤血区域于术后第二天发生点灶状坏死，部分区域片状坏死，大部分肝细胞发生气球样变性，术后第五天时出现纤维组织增生；非淤血区域术后第1、2、3天时均出现不同比例的气球样变性，术后第五天非淤血区域肝组织基本恢复正常。
　　 2.肝功能变化：四组血清ALT水平均于术后第1天达到高峰，并随时间的推移逐渐降低，A1组和其对照组A2组相比较，术后第一天、第二天、第三天，A1组的ALT水平明显高于A2组(P<0.01)，术后第五天时两组无统计学差异；B1组和其对照组B2组相比，术后第一天、第二天、第三天和第五天，B1组的ALT水平明显高于B2组(P<0.01)。
　　 3.肝再生情况：(1)肝再生指数：各组术后肝右叶肝体比随时间推移逐渐增加，A1组和B1组，术后第一天、第二天、第三天和第五天时，肝右叶的肝体比均明显高于其对照组(P<0.01)，残肝总体肝体比术后第一天、第二天、第三天和第五天时实验组和对照无统计学差异(P>0.05)；(2)PCNA指数和S期肝细胞比例：本研究发现增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)的表达与肝细胞S期比例的变化是基本一致的，术后第一天、第二天和第三天时A1组和B1组均高于其对照组(P<0.01)，术后第五天时无统计学差异；(3)HGF水平：各组HGF水平均于术后第一天达到高峰，A1组和其对照组A2组相比，术后第一天、第二天和第三天，A1组血清HGF水平明显高于A2组(P<0.01)，术后第五天时两组相比无统计学差异(P>0.05)；B1组和其对照组B2组相比，术后第一天、第二天和第三天，B1组血清HGF水平明显高于B2组(P<0.01)，术后第五天时两组相比无统计学差异(P>0.05)；(4)TNF-α水平：术后各组肝组织匀浆中TNF-α水平均于术后第二天达到高峰，A1组和其对照组A2组相比，术后第一天、第二天和第三天，A1组肝组织匀浆中TNF-α水平明显高于A2组(P<0.01)，术后第五天时两组相比无统计学差异(P>0.05)；B1组和其对照组B2组相比，术后第一天、第二天和第三天，B1组血清肝组织匀浆中TNF-α水平明显高于B2组(P<0.01)，术后第五天时两组相比无统计学差异(P>0.05)。
　　 [结论]
　　 1.部分肝切除联合独立肝叶淤血模型稳定，可用于相关的研究。
　　 2.术后早期，局部淤血在一定程度上加重大鼠部分肝切除术后早期的肝脏损伤，本实验在不同水平，证明了淤血对肝切除后早期总体肝再生无影响。
　　 3.淤血区域肝脏并非完全梗死对临床可能有着重要的意义，尤其对那些残肝质量较小或供肝偏小的病例，早期淤血区域的部分肝脏功能对维持病人的生理功能，为非淤血区域的代偿性再生创造了时间。