二种抗中性粒细胞胞浆抗体检验方法学比较及ANCA相关性肾炎的靶抗原实验研究

摘要

目的：探讨间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence，IIF)和酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assays，ELISA)对抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测结果一致性，分析ANCA相关性血管炎(anti-neutrophil cytoplasmicantibodies，AAV)患者器官受累特点及其靶抗原在ANCA相关性肾小球肾炎（ANCA associated glomerulamephritis，ANCA-associated GN）患者中的表达。
　　方法：收集2011年7月至2013年5月天津医科大学总医院临床科室提交非重复ANCA检测标本3852份及相关患者病例资料，应用IIF法和ELISA法联合对标本进行ANCA检测。对87例确诊为AAV的患者病例资料进行回顾性分析，并筛选经肾活检证实的未治疗的ANCA associated GN患者33例和30例健康人群做为正常对照，采用IIF法和ELISA法检测ANCA结果及血清中溶酶体相关膜蛋白-2(lysosomal-associated membrane protein-2，LAMP-2)抗体的水平，并观察其中25例ANCA associated GN患者活动期及好转后LAMP-2抗体的动态变化，分析其与疾病活动度及肾损害的相关性。
　　结果：ELISA法检测ANCA的阳性率高于IIF法(x2=14.405，p＜0.001)，二种检测方法总体符合率为94.93％(Kappa=0.611，p＜0.001); ELISA法漏检率为1.84％，IIF法漏检率为3.21％; IIF法在抗PR3阳性标本组和抗杀菌/通透性增强蛋白(bactericidal permeability increasing protein，BPI)阳性标本组的漏检率高于抗MPO阳性标本组(x2=25.050，p＜0.001;x2=11.623，p＜0.001)。AAV患者以60岁以上老年人男性多见，患病类型以显微镜下多血管炎(microscopic polyangiitis，MPA)多见，患者多出现肾脏受累。未治疗ANCA associated GN组患者血清中LAMP-2抗体的均值高于缓解期ANCA-associated GN组患者和正常对照，结果差异具有统计学意义(P＜0.001)。ANCA associated GN患者疾病缓解后与正常对照血清中LAMP-2抗体的水平差异无统计学意义(p＞0.05）。在未治疗ANCA associated GN组IIF镜下表现为不典型ANCA荧光模式患者与镜下表现为其他荧光模式患者血清中LAMP-2抗体的平均值差异有统计学意义(p＜0.05)。相关性分析显示，未治疗ANCA associated GN患者血清中LAMP-2抗体分别与ESR、Cr、BUN、24小时尿蛋白定量、新月体比例、BVAS呈正相关，与ALB、Hb、CCr、呈负相关。
　　结论：通过对3852份患者血清标本进行ANCA检测，结果显示二种检测方法总体符合率为94.93％(Kappa=0.611，p＜0.001)，ELISA法的漏检标本占所有阳性标本的19.34％，而IIF法的漏检标本则达到所有阳性标本的33.78％。若单独使用一种方法进行ANCA检测，将会导致高比例的阳性标本漏检。对临床怀疑为小血管炎、风湿性疾病以及肺间质纤维化的患者同时采用二种方法检测ANCA，以减少相关疾病的漏诊是十分必要的。LAMP-2抗体与ANCA-associatedGN疾病活动及肾损害严重程度有一定相关性。可能是判断ANCA associated GN病情活动和缓解的一个有效指标。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、二种方法检测抗中性粒细胞胞浆抗体的结果一致性实验研究分析

1．1 研究对象和方法

1．1．1 材料

1．1．2 方法

1．2 结果

1．2．1 ELISA-ANCA和IIF-ANCA检测结果总体分布

1．2．2 单独使用IIF法导致漏检的ANCA特异性靶抗原结果

1．2．3 二种方法在不同疾病中漏检情况

1．3 讨论

1．3．1 2种方法检测结果总体分析

1．3．2 单独使用IIF法导致漏检的ANCA特异性靶抗原结果分析

1．4 小结

二、87例ANCA相关系统性血管炎患者临床及病理诊断分析

2．1 材料和方法

2．1．1 患者资料

2．1．2 方法

2．2 结果

2．2．1 AAV患者系统受累临床表现

2．2．2 AAV患者系统受累临床表现

2．2．3 AAV患者合并感染情况

2．2．4 AAV患者肺部影像学特征

2．2．5 AAV患者实验室检查结果

2．2．6 AAV患者肾脏病理学特点

2．3 讨论

2．3．1 AAV患者一般资料分析结果

2．3．2 AAV患者受累系统及临床表现分析

2．3．3 AAV患者ANCA检测结果

2．4 小结

三、溶酶体相关膜蛋白-2抗体在ANCA相关性肾小球肾炎患者血清中表达水平及临床意义探讨

3．1 材料和方法

3．1．1 材料

3．1．2 方法

3．2 结果

3．2．1 ANCA检测结果

3．2．2 ANCA其他纯化靶抗原检测结果

3．2．3 血清中LAMP-2抗体的水平检测结果

3．2．4 未治疗ANCA-associated GN患者血清中LAMP-2抗体水平与肾损害严重程度及BVAS的相关性分析结果

3．3 讨论

3．3．1 ANCA-associated GN患者血清LAMP-2抗体水平高表达的意义

3．4 小结

结论

参考文献

发表论文情况说明

综述 抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎的发病机制及相关靶抗原的研究进展

致谢