雌激素受体β亚型在乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用

摘要

目的:
　　探讨在乳腺癌中，雌激素受体α亚型（Estrogen Receptorα，ERα）和β亚型（Estrogen Receptorβ，ERβ）的表达，以及与内分泌治疗耐药的关系和机制。
　　方法：
　　1、以人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231作为研究对象，采用半定量RT-PCR法和Western Blot法检测这两种细胞株ERα和ERβ的表达；在培养24h、48h、72h、96h后，采用MTT法检测各自的增殖情况。
　　2、以人乳腺癌细胞株 MCF-7和ERα/ERβ不同表达的人乳腺癌细胞株MCF-7[M/siα（ERαlow/ERβhigh）、M/siβ（ERαhigh/ERβlow）、M/HK（阴性对照）]作为研究对象，单独或联合应用不同终浓度的TAM（0.1、0.5、1、5、10μmol/L）和人重组IFN-γ（rhIFN-γ）（0.5，100 ng/mL）处理细胞，MTT法分析药物对细胞增殖的影响；半定量RT-PCR法和Western Blot法检测rhIFN-γ（0.5 ng/mL）对人乳腺癌MCF-7细胞中ERβ表达的影响。
　　3、以MCF-7、M/siα、M/siβ、M/HK作为研究对象，半定量RT-PCR法检测其耐药基因MDR1、TOPOII、LRP和GST-π的mRNA表达水平；Western Blot法检测其耐药相关信号通路MAPK、PI3K/Akt中p-ERK、p-Akt的蛋白表达水平。
　　结果：
　　1、半定量RT-PCR法检测结果显示，MCF-7细胞中ERα的mRNA表达水平显著高于MDA-MB-231[（0.191±0.005）vs（0.153±0.003），P＜0.05]，ERβ的mRNA表达水平低于MDA-MB-231[（0.462±0.001）vs（0.587±0.004），P＜0.05]；Western blot检测结果显示，MCF-7细胞中ERα的蛋白水平明显高于MDA-MB-231[（0.796±0.002）vs（0.041±0.008），P＜0.05]，ERβ的蛋白水平略低于MDA-MB-231[（0.57±0.011）vs（0.98±0.009），P＜0.05]；MTT法检测结果显示，经过24h、48h、72h培养，MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的增殖水平无显著性差异[（1.121±0.002）vs（1.201±0.062），（1.232±0.012） vs（1.287±0.054），（1.376±0.028）vs（1.401±0.033），P>0.05]，经过96h培养，MCF-7细胞的增殖率明显高于MDA-MB-231[（2.215±0.07） vs（1.469±0.011），P<0.05]。
　　2、MTT法检测结果显示，用不同浓度的TAM处理细胞24h，与对照组MCF细胞相比，ERβ高表达可促进高浓度TAM（1、5、10μmol/L）对MCF-7细胞增殖的抑制作用[（45.788±1.641）％ vs（24.288±1.170）%，（57.899±1.583）%vs（31.499±1.978）%，（59.853±1.648）% vs（38.039±1.482）%，均P＜0.05）]，并且该抑制作用与TAM浓度呈剂量依赖关系；用rhIFN-γ（0.5，100 ng/mL）预先处理72h，然后用10μmol/L TAM再处理24h，与对照组TAM组相比，rhIFN-γ（0.5，100 ng/mL）增加TAM对MCF-7、M/siα、M/siβ细胞增殖的抑制作用[（29.901±1.775）%，（40.209±1.083）% vs（25.066±1.122）%；（49.088±1.504）%，（52.254±2.223）% vs（46.088±1.288）%；（34.443±2.002）%，（50.125±1.554）% vs（20.977±1.724）%，P＜0.05]，并且该抑制作用与rhIFN-γ浓度呈剂量依赖关系；半定量RT-PCR和Western Blot检测结果显示，与空白对照组相比，rhIFN-γ（0.5 ng/mL）明显增加 MCF-7细胞中ERβmRNA的表达（0.248±0.0002 vs0.184±0.0006，P＜0.05）和蛋白的表达（0.521±0.003 vs0.356±0.019，P＜0.05）。
　　3、半定量RT-PCR检测结果显示，ERβ高表达可显著抑制MCF-7细胞耐药基因MDR1、TOPOII、LRP的mRNA表达水平（0.431±0.032 vs0.932±0.083，0.234±0.008 vs0.391±0.002，0.47±0.028 vs0.586±0.036；均P＜0.05）；Western Blot检测结果显示，ERβ高表达可显著下调其 Akt和ERK蛋白的磷酸化水平（0.224±0.006 vs0.437±0.007，0.367±0.015 vs0.756±0.039；均P＜0.05）。
　　结论：
　　1、人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231在培养96h以后，MCF-7的增殖水平要明显高于MDA-MB-231，这可能与乳腺癌细胞中不同 ER亚型的表达有关，即ERα高表达促进乳腺癌细胞的增殖，ERβ高表达抑制细胞的增殖。
　　2、ERβ可增加TAM对乳腺癌细胞的增殖抑制作用；rhIFN-γ增加乳腺癌细胞内ERβ的表达，并促进TAM对乳腺癌细胞增殖抑制作用。
　　3、ERβ的表达水平可影响乳腺癌细胞MCF-7对TAM的耐药性，这可能与降低乳腺癌细胞中相关耐药基因（MDR1、TOPOII、LRP）的表达，以及抑制MAPK与PI3K/Akt信号通路活化有关。

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缩略语

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、雌激素受体亚型对乳腺癌细胞增殖的影响

1.1对象和方法

1.2 结果

1.3 讨论

1.4小结

二、TAM单独或联合人重组IFN-γ对表达不同ER亚型的乳腺癌细胞增殖影响

2.1对象和方法

2.2 结果

2.3 讨论

2.4 小结

三、ERβ通过介导耐药基因的表达及信号通路PI3K/Akt和MAPK来调控TAM对乳腺癌细胞影响

3.1对象和方法

3.2 结果

3.3 讨论

3.4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

在学期间发表论文情况

综述: 雌激素受体β对乳腺癌耐药机制的影响

致谢