利用QM-FISH技术分析EGFR与AKT1基因拷贝数与乳腺癌预后的相关性

摘要

目的：
　　1.探讨乳腺癌患者中表皮生长因子受体 EGFR和丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶AKT1基因拷贝数变化情况。
　　2.探讨分析乳腺癌患者中表皮生长因子受体 EGFR和丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶AKT1基因拷贝数变化与临床病理资料的关系。
　　3.探讨分析表皮生长因子受体 EGFR和丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶 AKT1拷贝数变化对乳腺癌患者预后的影响，进而为今后提供有效的治疗靶点。
　　4.在体外细胞实验初步研究 EGFR抑制剂厄洛替尼联合 AKT1抑制剂LY294002对MCF-7过表达EGFR及AKT1细胞系的作用，观察双靶向治疗对过表达EGFR/AKT1细胞系的作用。
　　方法：
　　1. QM-FISH：收集2007年8月至2008年8月在天津市肿瘤医院住院收治的原发性浸润性乳腺癌患者中随机选取205例，收集病人的临床资料以及病理诊断时切除的原发瘤石蜡病理标本。对乳腺癌患者的石蜡切片进行定量多基因荧光原位杂交(Quantitative Multi-gene Fluorescence In Situ Hybridization，QM-FISH)，目的是检测EGFR与AKT1基因状况,分析同一细胞内EGFR与AKT1基因拷贝数与患者临床病理特征之间的关系，并评估其在乳腺癌预后预测中的价值。研究对象标准为：病理诊断均证实为浸润性导管癌。所有病例均为初治乳腺癌患者，手术之前未行放化疗及内分泌治疗。标本收集后经10％福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，4um切片。采用IBM SPSS21统计软件包与Graphpad5.0进行统计学分析。EGFR、AKT1基因拷贝数改变与临床病理指标关系采用卡方检验和Fisher确切概率法，患者的生存情况采用Kaplan-Meier法进行分析，生存率比较采用 Log-rank检验，Cox比例风险回归模型进行预后的多因素分析。P<0.05为差异有统计学意义。
　　2.体外细胞学实验：采用MTT法分别检测EGFR抑制剂厄洛替尼、AKT1抑制剂LY294002单药对EGFR/AKT1过表达细胞系MCF-7的生长抑制作用；检测EGFR抑制剂厄洛替尼联合AKT1抑制剂LY294002对EGFR/AKT1过表达细胞系MCF-7的生长抑制作用。
　　结果：
　　1.205例乳腺癌患者标本中，EGFR基因高拷贝数71例(34.6%)，AKT1基因高拷贝数57例(27.8%)，其中24例(11.7%)例患者既存在EGFR基因高拷贝数又存在AKT1基因高拷贝数，101例(49.3%)例为EGFR及AKT1基因低拷贝数。
　　2. EGFR及AKT1基因拷贝数与患者年龄、肿瘤分期、组织分级、ER、PR、HER2状态、分子亚型、Ki67以及p53表达无关。
　　3. EGFR基因高拷贝数影响乳腺癌患者5年生存率(P=0.0002)，而AKT1基因高拷贝数对生存期并无影响(P=0.1177),但EGFR基因高拷贝数伴随AKT1基因高拷贝数患者的预后较仅 EGFR基因高拷贝数患者差(P=0.0383)。单因素及多因素COX生存分析显示EGFR与AKT1基因高拷贝数[(P=0.000(U)，P=0.0001(C)]、组织学分级[P=0.001(U),P=0.012(C)]及淋巴结转移状态[P=0.046(U),P=0.158(C)]是影响乳腺癌患者5年总生存率的独立预后因素。
　　4.采用MTT法在体外实验中，与对照组、厄洛替尼或LY294002单药组相比，联合用药可进一步的抑制 EGFR/AKT1过表达细胞系的生长，初步印证了靶向治疗对EGFR/AKT1过表达细胞系的生长抑制作用。
　　结论：
　　1. EGFR与 AKT1基因高拷贝数在乳腺癌中比较常见。EGFR基因高拷贝数为71例(34.6％)，AKT1基因高拷贝数为57例(27.8％)。
　　2. EGFR及AKT1基因高拷贝数与患者临床病理资料不存在显著相关性。
　　3. EGFR及AKT1基因高拷贝数与乳腺癌临床预后不良有关，是影响乳腺癌患者5年OS的独立预后因素。
　　4.体外细胞实验中，初步印证了靶向治疗对EGFR/AKT1过表达细胞系的生长抑制作用，为EGFR及AKT1基因高拷贝数患者的治疗方案提供了新思路。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

对象和方法

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3 统计学方法

实验结果

2.1探针的HDF细胞验证

2.2 乳腺癌患者中EGFR和AKT1基因拷贝数变化

2.3 EGFR和AKT1基因拷贝数变化与临床病理特征的关系

2.4 EGFR与AKT1基因高拷贝数与乳腺癌预后的关系

2.5 MTT检测LY294002和厄洛替尼对乳腺癌细胞系的作用

讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:EGFR/PI3K/AKT通路抑制剂在乳腺癌中的研究进展

致谢